1. 文献背景信息  
  标题/作者/期刊/年份  
  “Single-cell RNA sequencing reveals the dynamics of hepatic non-parenchymal cells in autoprotection against acetaminophen-induced hepatotoxicity”  
  Lingqi Yu 等，《Journal of Pharmaceutical Analysis》，2023-08（北大核心期刊，SCI-E）。  

 

  研究领域与背景  
  药物性肝损伤（DILI）的“自身耐受/自保护”现象。临床观察到首次小剂量 APAP 可显著降低二次大剂量造成的肝毒性，但机制不明；既往研究多聚焦肝细胞，NPC（内皮、免疫、库普弗细胞）的动态作用尚缺高分辨率图谱。  

 

  研究动机  
  首次用单细胞转录组解析 NPC 在 APAP 自保护中的时空演变，为 DILI 的早期预警和干预提供新靶点。  

 

2. 研究问题与假设  
  核心问题  
  如何通过单细胞测序揭示肝脏非实质细胞在 APAP 自保护中的动态互作网络？  

 

  假设  
  小剂量 APAP 预处理重塑特定 NPC 亚群（如 Rspo3⁺ 内皮细胞、DC-3 树突细胞）→ 通过促增殖、抗炎症、促血管新生通路建立肝脏耐受。  

 

3. 研究方法学与技术路线  
  实验设计  
  动物模型观察性研究：小鼠分 APAP 敏感组（单次高剂量）vs 自保护组（小剂量预处理后高剂量）。  

 

  关键技术  
  – 10x Genomics scRNA-seq（2.4 万细胞，NPC 占比>80 %）  
  – 细胞亚群注释：SingleR + 已知 marker 交叉验证  
  – 细胞通讯：CellChat 分析配体-受体对  
  – 功能验证：体外肝片培养 + 抗体阻断实验（IFN-γ、VEGF 通路）  

 

  创新方法  
  首次建立“APAP 自保护”小鼠 scRNA-seq 图谱，并将 NPC-肝细胞跨细胞通讯量化。  

 

4. 结果与数据解析  
  主要发现  
  – 自保护组 Ccl2⁺ 内皮细胞几乎消失（从 8.7 % 降至 0.4 %），Rspo3⁺ 内皮细胞增至 12.3 %，与肝 Ki67⁺ 增殖指数正相关（r=0.82）。  
  – DC-3 亚群（Cd11c^low Sirpα^high）比例从 1.9 % 升至 6.4 %，其 VEGF-VEGFR2 信号强度提高 3.2 倍，促进血管新生。  
  – NK-3/NK-4 及 Sca-1⁻CD62L⁺ NKT 细胞 IFN-γ 通路活性降低 50 %，减轻炎症损伤。  
  – 抗炎 M2 巨噬细胞比例升高 2.1 倍，中性粒细胞 NETs 相关基因下调 60 %。  

 

  数据验证  
  独立重复两次 scRNA-seq 批次 + 流式细胞术验证关键亚群比例；肝片阻断实验证实 Rspo3 中和抗体可逆转自保护效应（ALT 升高 2.5 倍）。  

 

  局限性  
  仅小鼠模型；人类肝组织验证缺失；APAP 剂量换算至临床仍需药代动力学数据。  

 

5. 讨论与机制阐释  
  机制深度  
  作者提出“NPC 三轴”模型：Rspo3⁺ 内皮细胞驱动肝细胞增殖，DC-3 通过 VEGF 促进微血管修复，NK/巨噬细胞下调炎症反应，共同构成自保护网络。  

 

  与既往研究对比  
  与 2021 年报道的“肝细胞内在解毒增强”理论互补，本研究强调外源 NPC 的主动调控；扩展了对 DILI 耐受机制的多细胞层面理解。  

 

  未解决问题  
  人类肝穿样本验证、Rspo3 递送策略、NPC 亚群作为早期 DILI 生物标志物的可行性。  

 

6. 创新点与学术贡献  
  理论创新  
  提出“NPC 主导的自保护时空网络”概念，刷新 DILI 耐受机制框架。  

 

  技术贡献  
  scRNA-seq + 细胞通讯分析流程可迁移至其他药物（如抗结核药、化疗药）诱导的器官毒性研究。  

 

  实际价值  
  为开发基于 Rspo3 或 DC-3 的细胞/基因疗法提供临床前依据；指导 DILI 早期诊断面板（血浆 Rspo3、DC-3 特征基因）。