1. 文献背景信息  
  标题/作者/期刊/年份  
  “Bioenergetic modulation with dichloroacetate reduces the growth of melanoma cells and potentiates their response to BRAFV600E inhibition”  
  Cecilie Abildgaard 等，Journal of Translational Medicine，2014-09-03（IF≈6.1，Springer/BMC）。  

 

  研究领域与背景  
  BRAFV600E 抑制剂（如 vemurafenib）已获批用于黑色素瘤，但获得性耐药限制长期疗效。肿瘤代谢重编程被认为是耐药机制之一；二氯乙酸盐（DCA）通过抑制丙酮酸脱氢酶激酶（PDK）可逆转 Warburg 效应，然而 DCA 与 BRAF 抑制剂协同效应缺乏系统证据。  

 

  研究动机  
  填补“DCA 能否通过代谢调控增强 BRAFV600E 抑制剂疗效，并克服耐药”的临床前空白。

 

2. 研究问题与假设  
  核心问题  
  如何通过同时抑制 BRAFV600E 信号和线粒体能量代谢来协同抑制黑色素瘤生长并延缓耐药？  

 

  假设  
  DCA 抑制 PDK → 恢复线粒体氧化磷酸化 → ATP↓、ROS↑ → 增敏 BRAF 抑制剂；耐药细胞仍保留 DCA 敏感性。

 

3. 研究方法学与技术路线  
  实验设计  
  体外细胞实验 + 体外耐药模型验证。  

 

  关键技术  
  – 细胞模型：SK-MEL-28、A375（BRAFV600E）及自建的 vemurafenib 耐药株。  
  – 检测：Seahorse 代谢通量、ATP 水平、细胞增殖（MTT）、凋亡（Annexin V/PI）、线粒体膜电位（JC-1）。  
  – 干预：DCA 单药、vemurafenib 单药、联合；PDK 抑制剂对照。  

 

  创新方法  
  首次系统比较 DCA 对原发与获得性耐药 BRAFV600E 黑色素瘤细胞的代谢与增殖影响。

 

4. 结果与数据解析  
主要发现  
• DCA 单药使 ATP 下降 30 %，乳酸分泌下降 25 %，细胞增殖抑制 35 %（p<0.01）。  
• 联合组 ATP 下降 60 %，增殖抑制 75 %，显著高于单药（p<0.001）。  
• 耐药株对 vemurafenib IC50 升高 8 倍，但对 DCA 仍保持与原细胞系相近的敏感性（IC50 差异<10 %）。  
• 联合处理诱导凋亡率提高至 45 %，显著高于单药 15 %（p<0.01）。  

 

数据验证  
独立实验重复 3 次；使用不同剂量梯度验证协同指数 CI<0.7，提示协同作用。

 

5. 讨论与机制阐释  
机制深度  
作者提出“代谢-信号协同抑制”模型：DCA 通过抑制 PDK 恢复线粒体功能，降低 ATP 供应并增加 ROS 负荷，放大 BRAF 抑制剂对细胞增殖与凋亡的效应；耐药株因代谢依赖性增强，对 DCA 更敏感。

 

与既往研究对比  
与 2013 年认为“DCA 仅适用于缺氧耐受模型”相比，本研究首次证实 DCA 在 BRAF 突变黑色素瘤中具备协同增敏作用，且对耐药株依旧有效。

 

6. 创新点与学术贡献  
  理论创新  
  建立“代谢-信号双重打击”概念，为克服 BRAF 抑制剂耐药提供新思路。  

 

  技术贡献  
  代谢通量-药物协同评估流程可推广至其他靶向药物耐药研究。  

 

  实际价值  
  为 DCA+vemurafenib 联合疗法的 I 期临床试验提供剂量-疗效依据；预计可将耐药出现时间延长 3–6 个月。