1. 文献背景信息  
  标题/作者/期刊/年份  
  “In-depth Site-specific Analysis of N-glycoproteome in Human Cerebrospinal Fluid and Glycosylation Landscape Changes in Alzheimer’s Disease”  
  Zhengwei Chen 等，Molecular & Cellular Proteomics，2021-08（IF≈6.1，ASBMB 旗舰）。  

 

  研究领域与背景  
  脑脊液（CSF）是中枢神经系统（CNS）液体活检的“金标准”，但既往 CSF 糖蛋白质组学仅停留在蛋白水平，缺乏位点特异性 N-糖链信息；AD 患者 CSF 中糖基化改变报道零散，缺少系统图谱。  

 

  研究动机  
  填补“CSF 位点特异性 N-糖蛋白质组全景”与“AD 糖基化失调机制”两大空白，为糖蛋白 AD 生物标志物开发提供数据与方法基础。

 

2. 研究问题与假设  
  核心问题  
  如何利用高覆盖度 N-糖蛋白质组技术揭示 AD 患者 CSF 中特异的位点糖基化改变？  

 

  假设  
  AD 患者 CSF 呈现整体低岩藻糖化及特定蛋白（α1-抗胰凝乳蛋白酶等）糖基化位点特异改变，这些变化与 AD 病理进程相关。

 

3. 研究方法学与技术路线  
  实验设计  
  横断面病例-对照研究 + 技术方法学优化。  

 

  关键技术  
  – 样本：健康对照（n=10）vs AD 患者（n=10）CSF。  
  – 创新富集：HILIC + 苯硼酸双重富集 N-糖肽；  
  – 质谱：EThcD 碎裂 + Orbitrap Eclipse；  
  – 生信：自建糖肽搜索引擎，位点 FDR<1 %；  
  – 验证：平行反应监测（PRM）定量差异糖型。  

 

  创新方法  
  首次将 EThcD 与双重富集结合，实现 CSF 完整 N-糖肽的大规模、位点特异性解析。

 

4. 结果与数据解析  
主要发现  
• 深度图谱：鉴定 2,893 条完整 N-糖肽，对应 511 个糖基化位点、285 种糖蛋白，为迄今最大 CSF N-糖蛋白质组数据集。  
• AD 特征：整体岩藻糖化水平↓21 %（p<0.01）；α1-抗胰凝乳蛋白酶位点 N88 和 N108 的岩藻糖化分别↓46 %和↓38 %。  
• 功能靶点：Ephrin-A3、CN1 等蛋白的糖型在 AD 组特异缺失。  
• PRM 验证：差异糖型在独立队列重现性>90 %。  

 

5. 讨论与机制阐释  
机制深度  
提出“糖基化-蛋白稳态”假说：岩藻糖缺失削弱蛋白折叠与分泌，导致 CSF 中神经保护蛋白功能下降，加速 AD 病理。  

与既往研究对比  
与 2020 年仅报道蛋白水平下调相比，首次揭示位点糖基化缺失是功能缺陷的潜在原因。

 

6. 创新点与学术贡献  
  理论创新  
  建立“CSF 位点糖基化-AD 病理”关联框架，为糖基化作为早期病理事件提供证据。  

 

  技术贡献  
  双重富集-EThcD 方法可推广至血浆、唾液等其他体液糖蛋白质组。  

 

  实际价值
  已提交两项糖型专利；与药企合作开发岩藻糖化 α1-抗胰凝乳蛋白酶 ELISA 试剂盒，预计 2025 年进入多中心验证。