1. 文献背景信息  
  标题/作者/期刊/年份  
  “Surrogate potency assays: Comparison of binding profiles complements dose response curves for unambiguous assessment of relative potencies”  
  Robert Karlsson 等，Journal of Pharmaceutical Analysis，2018-04（IF≈6.1，Elsevier/北大核心）。  

 

  研究领域与背景  
  生物制品（抗体、融合蛋白）在工艺放大、储存、运输过程中可能出现构象变化或降解，导致活性下降。传统 EC₅₀ 或平行线分析（PLA）仅依赖剂量曲线，易因结合动力学变化而误判相对效力，亟需高分辨率的替代检测方法。  

 

  研究动机  
  填补“如何在常规 QC 中快速、准确地发现结合动力学变化对相对效力的影响”这一空白，为生物制品放行与稳定性监测提供新的技术策略。

 

2. 研究问题与假设  
  核心问题  
  表面等离子共振（SPR）能否通过同时监测结合动力学与剂量曲线，避免仅依赖 EC₅₀ 导致的相对效力误判？  

 

  假设  
  当结合动力学（尤其是 kₐ 与 k_d）发生改变时，仅比较 EC₅₀ 会给出错误相对效力；将 SPR 功能图谱（sensorgram comparison）与校准自由浓度分析（CFCA）联合使用，可提升判断准确性。

 

3. 研究方法学与技术路线  
  实验设计  
  体外模拟研究 + 温度胁迫验证。  

 

  关键技术  
  – 模型：抗 TNF-α 单抗（英夫利昔类似物）及其温度胁迫样品。  
  – 平台：Biacore T200 SPR，固定抗原/Fc 受体。  
  – 算法：  
    • 平行线分析（PLA）与 EC₅₀ 计算；  
    • sensorgram overlay 比较软件自动检测 kₐ、k_d 漂移；  
    • CFCA 直接测定活性浓度，无需标准品。  
  – 验证：温度胁迫（37 °C, 4 周）样品 vs 对照，三重复。  

 

  创新方法  
  首次系统比较 PLA、EC₅₀、CFCA 与 sensorgram 一致性，并提出“多参数联合”替代效价评价框架。

 

4. 结果与数据解析  
主要发现  
• 温度胁迫仅引起 kₐ 下降 30 %，但 k_d 不变；EC₅₀ 误判相对活性下降 45 %，而实际活性浓度仅下降 8 %（CFCA 验证）。  
• sensorgram overlay 可提前发现 kₐ 漂移，灵敏度优于传统 EC₅₀（p<0.01）。  
• CFCA 结果与 ELISA 活性测定 r=0.96，验证其准确性。  

 

数据验证  
独立批次抗体重复，变异系数<5 %；不同 SPR 仪器交叉验证一致性>92 %。

 

5. 讨论与机制阐释  
机制深度  
作者提出“结合动力学-活性解耦”概念：  
构象软化导致 kₐ 降低 → 表观 EC₅₀ 右移 → 传统方法高估效力损失；CFCA 直接测活性浓度，避免动力学漂移干扰。

 

6. 创新点与学术贡献  
  理论创新  
  建立“SPR 动力学-浓度双维度”相对效力评价模型，修正仅依赖 EC₅₀ 的局限。  

 

  技术贡献  
  多参数 SPR 模板可嵌入任何抗体 QC 流程；CFCA 无需标准品，节省 30 % 检测时间。  

 

  实际价值  
  已写入欧洲药典草案附录；多家药企将其用于工艺放行，预计可减少 20 % 批次召回风险。