Background
There have been many significant advances in the diagnosis and treatment of non-small cell lung cancer (NSCLC). However, the mechanism underlying the progression of NSCLC is still not clear. Plant homodomain finger-like domain-containing protein 5A (PHF5A) plays an important role in processes of chromatin remodeling, morphological development of tissues and organs and maintenance of stem cell pluripotency. This study aims to investigate the role of PHF5A in the proliferation and migration of NSCLC.
Conclusions
These results demonstrated that PHF5A may play an important role in progression of NSCLC by regulating the PI3K/AKT signaling pathway. 【中文题目：PHF5A通过调节PI3K/AKT通路 促进非小细胞肺癌的增殖和迁移】 【中文摘要：背景与目的 非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的诊断及治疗仍然是目前研究的热点与难点，探索NSCLC增殖和转移的分子机制及寻找新的靶点是当前研究的焦点。PHD锌指结构域蛋白5A（plant homodomain finger-like domain-containing protein 5A, PHF5A）在维持正常细胞的基本生物学功能中起重要作用。本研究旨在探讨PHF5A在NSCLC细胞增殖、转移中的作用及分子机制。方法 采用慢病毒转染方法构建A549、PC-9 PHF5A稳定过表达细胞株；采用siRNA技术构建PHF5A抑制的H292和H1299细胞株。利用流式细胞技术检测细胞周期。采用克隆形成、MTT法、细胞增殖计数检测细胞增殖情况，采用细胞迁移实验及细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力变化。利用A459稳定过表达细胞株构建裸鼠成瘤模型，并观察比较PHF5A过表达细胞与对照组细胞的成瘤能力。用Western blot方法分析细胞内PHF5A及PI3K/AKT通路及其下游p21、c-Myc的表达变化。结果 与对照组相比，PHF5A过表达组的PHF5A表达明显增加，PHF5A抑制组的PHF5A表达明显减少（P<0.05）；PHF5A过表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率均明显升高，抑制PHF5A表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率明显下降（P<0.05）。成瘤实验中，与对照组相比，PHF5A过表达组成瘤速度明显加快，瘤体体积明显增加（P<0.05）。利用Transwell迁移实验以及划痕实验证实PHF5A过表达组细胞的迁移能力较对照组明显增加，抑制PHF5A的表达可以降低细胞的迁移能力（P<0.05）。同时，抑制PHF5A的表达使细胞周期被抑制在G1期/S期，PI3K、磷酸化AKT和下游c-Myc表达明显减少（P<0.05），p21表达明显升高（P<0.05）。结论 PHF5A表达增加可以促进NSCLC细胞增殖及迁移，PI3K/AKT信号通路可能是其作用的机制之一。 】 【中文关键词：PHF5A；肺肿瘤；增殖；迁移】.
Methods
A549 and PC-9 PHF5A overexpression cell lines were constructed. PHF5A expression was decreased in H292 and H1299 cells by using siRNA. Flow cytometry was used to detect the cell cycle. MTT assay and clone formation assay were used to examine the proliferative ability of NSCLC, while migration assay and wound healing assay were performed to evaluate the ability of migration. Western blot analysis was used to measure the expressions of PI3K, p-AKT and the associated downstream factors.
Results
Up-regulation of PHF5A in A549 and PC-9 cells increased the proliferation rate, while down-regulation of PHF5A in H292 and H1299 cells inhibited the proliferation rate at 24 h, 48 h and 72 h (P<0.05). The metastatic ability was elevated in the PHF5A-overexpresion groups, while reduced in the PHF5A-down-regulation group (P<0.05). In addition, reduced expression of PHF5A induced cell cycle arrest at G1/S phase (P<0.05). Furthermore, decreased expression of PHF5A reduced the expression levels of PI3K, phosphorylation of AKT, c-Myc (P<0.05) and elevated the expression of p21 (P<0.05). Conclusions: These results demonstrated that PHF5A may play an important role in progression of NSCLC by regulating the PI3K/AKT signaling pathway. 【中文题目：PHF5A通过调节PI3K/AKT通路 促进非小细胞肺癌的增殖和迁移】 【中文摘要：背景与目的 非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）的诊断及治疗仍然是目前研究的热点与难点，探索NSCLC增殖和转移的分子机制及寻找新的靶点是当前研究的焦点。PHD锌指结构域蛋白5A（plant homodomain finger-like domain-containing protein 5A, PHF5A）在维持正常细胞的基本生物学功能中起重要作用。本研究旨在探讨PHF5A在NSCLC细胞增殖、转移中的作用及分子机制。方法 采用慢病毒转染方法构建A549、PC-9 PHF5A稳定过表达细胞株；采用siRNA技术构建PHF5A抑制的H292和H1299细胞株。利用流式细胞技术检测细胞周期。采用克隆形成、MTT法、细胞增殖计数检测细胞增殖情况，采用细胞迁移实验及细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力变化。利用A459稳定过表达细胞株构建裸鼠成瘤模型，并观察比较PHF5A过表达细胞与对照组细胞的成瘤能力。用Western blot方法分析细胞内PHF5A及PI3K/AKT通路及其下游p21、c-Myc的表达变化。结果 与对照组相比，PHF5A过表达组的PHF5A表达明显增加，PHF5A抑制组的PHF5A表达明显减少（P<0.05）；PHF5A过表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率均明显升高，抑制PHF5A表达组24 h、48 h、72 h细胞增殖率明显下降（P<0.05）。成瘤实验中，与对照组相比，PHF5A过表达组成瘤速度明显加快，瘤体体积明显增加（P<0.05）。利用Transwell迁移实验以及划痕实验证实PHF5A过表达组细胞的迁移能力较对照组明显增加，抑制PHF5A的表达可以降低细胞的迁移能力（P<0.05）。同时，抑制PHF5A的表达使细胞周期被抑制在G1期/S期，PI3K、磷酸化AKT和下游c-Myc表达明显减少（P<0.05），p21表达明显升高（P<0.05）。结论 PHF5A表达增加可以促进NSCLC细胞增殖及迁移，PI3K/AKT信号通路可能是其作用的机制之一。 】 【中文关键词：PHF5A；肺肿瘤；增殖；迁移】.