做 Tau 实验前，先查这个隐形变量

做小胶质细胞和 Tau 蛋白互作的姐妹，这个坑一定要提前避⚠️
大肠杆菌表达的重组 Tau，天然就带着内毒素（LPS）的风险。更麻烦的是：LPS 带负电、Tau 带正电，两者一碰就"焊死"在蛋白上——常规纯化根本洗不干净
结果就是：你以为加的是 Tau，其实还加了一份"炎症放大器"。小胶质细胞的 TLR4 通路被误触发，细胞因子哗哗释放，实验数据里到底谁是"真凶"，根本说不清
今天这篇 STAR Protocols 给了一个把"去内毒素"直接做进纯化流程的思路，核心三招
柱上除热原：蛋白挂上镍柱后，立刻用 0.1% Triton X-114 洗 50 个柱体积，利用它相分离的特性把内毒素解离带走
✂️ SUMO3 标签 + SENP2 酶切：得到天然 N 端的全长 2N4R Tau，还减少降解
CIEX 阳离子交换 + 除内毒素树脂：双重保险扫尾
最终成绩单
· 3 L 菌液拿到约 3.5 mg 高纯度 Tau
· 工作浓度（1 μg/mL）下内毒素 ≤0.01 EU/mL
· 蛋白活性不掉，还能正常聚纤维、做播种实验
文章还附赠了肝素诱导Tau聚合的全套参数：4:1 摩尔比、37 度摇 11 天、TEM 负染 + FRET biosensor 双重验证
做阿尔茨海默/tau 病方向、或者任何"正电荷重组蛋白 + 免疫细胞"体系的朋友，建议把这篇收进收藏夹。后面再看到"小胶质细胞活化"的数据，记得先问一句：内毒素测了吗？