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经验证应用
| 项目 | 详情 |
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| WB | Western blot analysis of extracts from HT-29(lane 2(20ug), A431(lane 3(20ug) and HEK293(lane 4(20ug) using p53 Antibody ( HY-P80257 ) Rabbit mAb. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% non-fat milk in TBST for 2 hour at room temperature. The primary antibody (1/1000) and Loading control antibody (Beta Actin, HY-P83730, 1/10000) was used in 5% non-fat milk in TBST at 4°C overnight. Goat Anti-Mouse/Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody (1/10000) was used for 1 hour at room temperature. Western blot analysis of extracts from HT-29(lane 2(20μg), HT-29 (lane 3(40μg),using p53 Antibody. Proteins were transferred to a PVDF membrane and blocked with 5% BSA in TBST for 2 hour at room temperature. The primary antibody and Loading control antibody (Beta Actin, HY-P80438, 1/3000) was used in 5% BSA in TBST at 4°C overnight. Goat Anti-Mouse/Rabbit IgG-HRP Secondary Antibody (HY-P8004/HY-P8001, 1/10,000) was used for 1 hour at room temperature. |
| IHC-P | Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded m tissue using p53 Antibody (YA250). The section was pre-treated using heat mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer (pH 9.0) for 20 minutes. The tissues were probed with the primary antibody (HY-P80257,1/100) overnight at 4℃. The detection was performed using an HRP conjugated compact polymer system. DAB was used as the chromogen. Tissues were counterstained with hematoxylin and mounted with neutral balsam. Immunohistochemical analysis of paraffin-embedded human breast cancer tissue using P53 Antibody (YA250). The section was pre-treated using heat mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer (pH 9.0) for 20 minutes. The tissues were probed with the primary antibody (HY-P80257,1/100) overnight at 4℃. The detection was performed using an HRP conjugated compact polymer system. DAB was used as the chromogen. Tissues were counterstained with hematoxylin and mounted with neutral balsam. |
| ICC | Immunocytochemistry analysis of 293T cells labeling p53 Antibody ( HY-P80257 ) at 1/50 dilution. Cells were fixed in 4% paraformaldehyde for 15 minutes at room temperature, permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 10 minutes at room temperature, then blocked with BSA for Immunol Staining for 10 min at room temperature. Cells were then incubated with p53 Antibody ( HY-P80257 ) at 1/50 dilution in BSA for Immunol Staining at 4 ℃ Overnight. AF488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HY-P8002, Green) was used as the secondary antibody at 1/1,000 dilution. PBS instead of the primary antibody was used as the secondary antibody only control. The Nuclear counterstain was DAPI (Blue). Immunocytochemistry analysis of 293T cells labeling p53 Antibody ( HY-P80257 ) at 1/200 dilution. Cells were fixed in 4% paraformaldehyde for 15 minutes at room temperature, permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 10 minutes at room temperature, then blocked with BSA for Immunol Staining for 10 min at room temperature. Cells were then incubated with p53 Antibody ( HY-P80257 ) at 1/200 dilution in BSA for Immunol Staining at 4 ℃ Overnight. AF488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG H&L（HY-P8002, Green) was used as the secondary antibody at 1/1,000 dilution. PBS instead of the primary antibody was used as the secondary antibody only control. The Nuclear counterstain was DAPI (Blue). |
详细信息
背景信息
功能： p53 是一种多功能转录因子，在结合其靶 DNA 序列后可诱导细胞周期阻滞、DNA 修复或细胞凋亡。它在多种肿瘤类型中发挥抑癌作用，可根据生理环境和细胞类型的不同，诱导生长阻滞或凋亡。p53 通过调控细胞分裂所需的一系列基因的表达，负向调控细胞分裂，其中一个被激活的基因是细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂。p53 诱导细胞凋亡的作用似乎是通过刺激 BAX 和 FAS 抗原的表达，或抑制 Bcl-2 的表达介导的。其促凋亡活性可通过与 PPP1R13B/ASPP1 或 TP53BP2/ASPP2 相互作用被激活，而当 PPP1R13L/iASPP 竞争性取代 PPP1R13B/ASPP1 或 TP53BP2/ASPP2 与 p53 的结合时，该促凋亡活性会被抑制。p53 与线粒体 PPIF 协同参与氧化应激诱导的坏死激活，该功能很大程度上不依赖于转录调控。它可诱导长基因间非编码 RNA p21 (lincRNA-p21) 和 lincRNA-Mkln1 的转录，其中 lincRNA-p21 参与 TP53 依赖的转录抑制，最终导致细胞凋亡，且似乎对细胞周期调控也有影响。p53 还参与 Notch 信号通路的交叉调控。在 DNA 损伤应答中，p53 与 CAK 复合物结合时可抑制 CDK7 的激酶活性，从而阻滞细胞周期进程。异构体 2 可增强异构体 1 对部分 (而非全部) TP53 诱导型启动子的反式激活活性；异构体 4 会抑制异构体 1 的反式激活活性，削弱异构体 1 介导的生长抑制作用；异构体 7 则抑制异构体 1 介导的细胞凋亡。p53 还可通过抑制 CLOCK-BMAL1 介导的 PER2 转录激活，调控生物钟 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] 。 亚细胞定位： 细胞质；细胞核；细胞核，PML 体；内质网；线粒体基质；细胞质，细胞骨架，微管组织中心，中心体；细胞核；细胞质；细胞核；细胞质；细胞核；细胞质；细胞核；细胞质；细胞核；细胞质；细胞核；细胞质；细胞质 表达水平： 组织特异性：普遍存在。这些亚型在多种正常组织中表达，但表达方式具有组织依赖性。亚型 2 在大多数正常组织中表达，但在脑、肺、前列腺、肌肉、胎脑、脊髓和胎肝中未检测到。亚型 3 在大多数正常组织中表达，但在肺、脾、睾丸、胎脑、脊髓和胎肝中未检测到。亚型 7 在大多数正常组织中表达，但在前列腺、子宫、骨骼肌和乳腺中未检测到。亚型 8 仅在结肠、骨髓、睾丸、胎脑和肠道中检测到。亚型 9 在大多数正常组织中表达，但在脑、心脏、肺、胎肝、唾液腺、乳腺或肠道中未检测到。 诱导：DNA 损伤后上调。同工型 2 在肿瘤细胞应激反应中不被诱导。 异构体 & 翻译后修饰： p53 有 9 种异构体：P04637-1：43653 Da (预测)；P04637-2：37826 Da (预测)；P04637-3：38501 Da (预测)；P04637-4：39320 Da (预测)；P04637-5：33493 Da (预测)；P04637-6：34168 Da (预测)；P04637-7：29553 Da (预测)；P04637-8：23726 Da (预测)。 P04637-9：24401 Da (预测值)。 CREBBP 对 Lys-382 的乙酰化作用增强转录活性。EP300 对 Lys-382 的乙酰化作用。 SIRT1 对 Lys-382 的去乙酰化作用会削弱其诱导促凋亡程序和调节细胞衰老的能力。SIRT2 对 Lys-382 的去乙酰化作用会削弱其以 AKT 依赖的方式诱导转录激活的能力。Lys-381 的乙酰化作用会增加其稳定性。 SIRT6 对 Lys-381 的去乙酰化作用降低其稳定性，从而调控细胞衰老。KAT5、KAT6A 和 KAT8 对 Lys-120 的乙酰化作用调控其诱导促凋亡程序的能力。AARS1 的乳酸化作用阻止其发生液-液相分离 (LLPS)，从而抑制转录因子活性。Ser 残基的磷酸化介导转录激活。HIPK4 对 Ser-9 的磷酸化作用增强其对 BIRC5 启动子的抑制活性。 VRK1 磷酸化 Thr-18 位点。DNA 损伤后，CHEK2 磷酸化 Ser-20 位点，从而阻止 MDM2 的泛素化。Ser-46 位点的磷酸化是 CREBBP 乙酰化所必需的。VRK2 的异构体 1 和异构体 2 均可磷酸化 Thr-18 位点。VRK2 异构体 2 对 Thr-18 位点的磷酸化导致 MDM2 介导的泛素化减少，而 EP300 介导的乙酰化增加。 p53/TP53 在基因毒性和氧化应激反应中，通过 CDK5 介导的 Ser-15、Ser-33 和 Ser-46 位点磷酸化而稳定，导致 p53/TP53 的积累，尤其是在细胞核内，从而诱导 p53/TP53 靶基因的转录激活。Ser-392 位点的磷酸化通过增加 TP53/p53 凝聚体的流动性来调节其发生液-液相分离的能力；在 Thr-55 位点被 PP2A-PPP2R5C 全酶去磷酸化。SV40 小 T 抗原抑制 PP2A AC 形式的去磷酸化；C 端碱性区域可能发生 O-糖基化。在 EB-1 细胞系中进行了研究；被 MDM2 和 SYVN1 泛素化，导致蛋白酶体降解。 p53/TP53 可被 RFWD3 泛素化，RFWD3 与 MDM2 协同作用。p53/TP53 可被 MKRN1 在 Lys-291 和 Lys-292 位点泛素化，导致蛋白酶体降解。p53/TP53 可被 USP10 去泛素化，导致其稳定。p53/TP53 可被 TRIM24、RFFL、RNF34 和 RNF125 泛素化，导致蛋白酶体降解。 TOPORS 介导的泛素化导致降解。USP7 介导的去泛素化导致稳定 。异构体 4 以 MDM2 非依赖的方式进行单泛素化。COP1 介导的泛素化导致蛋白酶体降解。泛素化及其后续的蛋白酶体降解受 CCAR2 负调控。在 Lys-24 位点被 MUL1 进行多聚泛素化修饰，导致蛋白酶体降解 。在 USP3 进行去泛素化修饰，导致其稳定。在 MSL2 进行泛素化修饰，促进其胞质定位。此外，还可被 SCF (FBXO22)-KDMA4A 复合物泛素化修饰，导致蛋白酶体降解；在 Lys-372 位点被 SETD7 进行单甲基化修饰，导致其稳定并增强转录活性。 SMYD2 对 Lys-370 位点进行单甲基化，导致 DNA 结合活性降低，进而影响转录调控活性。Lys-372 位点的单甲基化可阻止其与 SMYD2 的相互作用，并抑制 Lys-370 位点的后续单甲基化。EHMT1 和 EHMT2 对 Lys-373 位点进行二甲基化。KMT5A 对 Lys-382 位点进行单甲基化，促进其与 L3MBTL1 的相互作用，从而抑制转录活性。Lys-370 和 Lys-382 位点的二甲基化通过稳定 p53 与甲基读取蛋白 PHF20 的结合，从而降低 p53 的泛素化水平。UBC9 对 Lys-386 进行 SUMO 化修饰。 亚基： 形成同源二聚体和同源四聚体。以同源四聚体形式结合 DNA。与 AXIN1 相互作用。与组蛋白乙酰转移酶 EP300 和甲基转移酶 HRMT1L2 及 CARM1 相互作用，并将它们募集到启动子区域。与 TAF1 (通过 C 端) 相互作用；当 TAF1 是 TFIID 复合物的组成部分时。与 ING4 相互作用；这种相互作用可能是间接的。存在于与 CABLES1 和 TP73 的复合物中。与 HIPK1、HIPK2 和 TP53INP1 相互作用。与 WWOX 相互作用。可能与 HCV 核心蛋白相互作用。与 USP7 和 SYVN1 相互作用。与 HSP90AB1 相互作用。与 ARMC10、CDKN2AIP、NUAK1、STK11/LKB1、UHRF2 和 E4F1 相互作用。与 YWHAZ 相互作用；该相互作用增强 TP53 的转录活性。YWHAZ 在 Ser-58 位点的磷酸化抑制该相互作用。通过 DNA 结合域与 MAML1 (通过 N 端) 相互作用。与 MKRN1 相互作用。通过 C 端与 PML 相互作用。与 MDM2 相互作用；导致 TP53 的泛素化和蛋白酶体降解。直接与 FBXO42 相互作用；导致 TP53 的泛素化和降解。