线粒体也能流式分选了?

2026年10月26日浏览 0来源:本站

做线粒体研究的朋友应该都遇到过同一个尴尬:差速离心收下来的线粒体是"一锅端"的,功能强的弱的混在一起,测出来全是平均值今天这篇 STAR Protocols 给了一个很聪明的解法——FAMS,荧光激活线粒体分选。思路其实借的是流式的老逻辑:在细胞里装一个 split-GFP"接触开关"(SPLICS),一半锚在内质网上、一半锚在

做线粒体研究的朋友应该都遇到过同一个尴尬:差速离心收下来的线粒体是"一锅端"的,功能强的弱的混在一起,测出来全是平均值
今天这篇 STAR Protocols 给了一个很聪明的解法——FAMS,荧光激活线粒体分选。
思路其实借的是流式的老逻辑:
在细胞里装一个 split-GFP"接触开关"(SPLICS),一半锚在内质网上、一半锚在线粒体外膜上,只有两者贴到 10 纳米以内才会重新组装发光✨
然后诱导表达 → 分离线粒体 → 上光谱流式的小颗粒模式,按 GFP 强度把"紧贴 ER 的线粒体"(HI 群)和"疏远 ER 的线粒体"(LO 群)分开收。
几个让我眼前一亮的细节
线粒体只有 0.2–2 μm,方案用亚微米标准微球(200 nm–2 μm)先做尺寸定标,这是全流程第一道关卡
分离全程低温,27G 针头抽打 10 次匀浆,7000g 沉线粒体
分选速率 5000 events/s,4°C 收样,每群能收 6000 万颗——足够喂一组蛋白组学
✅ 作者已经用蛋白组学验证过:GFP 阳性那群显著富集 ER 相关蛋白
适用范围也不限于 SW480/HT1080,理论上任何能建稳转的细胞系都能套用,还给了 5 个踩坑排查(G418 筛选、克隆异质性、产量低、尺寸门圈不出、染料浓度)。
做线粒体-内质网接触、代谢区室化的同学真的可以收藏,下次组会或者开题说不定就用上了

本板块不设评论与点赞,仅支持收藏

特别声明

1、本页面内容包含部分的内容是基于公开信息的合理引用;引用内容仅为补充信息,不代表本站立场。

2、若认为本页面引用内容涉及侵权,请及时与本站联系,我们将第一时间处理。

3、其他媒体/个人如需使用本页面原创内容,需注明“来源:[生知库]”并获得授权;使用引用内容的,需自行联系原作者获得许可。

4、投稿及合作请联系:info@biocloudy.com。