Western Blot全流程一页通！11步+避坑警告

WB 新手直接抄！Western Blot 完整流程 11 步一页通，每步都标了翻车警告⚠
1️⃣ 样品准备：冰上裂解（RIPA+蛋白酶抑制剂），12000-14000rpm 4℃离心取上清
2️⃣ 蛋白定量：BCA/Bradford 做标准曲线，上样 20-60μg/孔
3️⃣ 样品处理：4×上样缓冲液 95℃ 5-10min 变性
4️⃣ SDS-PAGE 电泳：80V 浓缩胶 → 120-150V 分离胶
5️⃣ 转膜：三明治结构排好，湿转 100-160V 60-90min 冰上，别留气泡！
6️⃣ 封闭：5% 脱脂奶粉/BSA（磷酸化抗体选 BSA）1h
7️⃣ 一抗：4℃ 过夜 8️⃣ 二抗：1:1万 1h
9️⃣ ECL 曝光：别过曝 ImageJ 定量：目标/内参（β-actin、GAPDH）
1️⃣1️⃣ 剥膜再利用：0.1% SDS 剥膜液洗 10-30min
内附注意事项小贴士：全程低温、防降解、抗体优化、洗膜充分。建议收藏打印贴实验室！