科研图鉴
Research Atlas图文科研资讯与知识卡片，以细胞科普为主线，覆盖细胞培养、实验室日常与科研成长。仅收录科研向内容。
ELISA原理一讲就懂！磁铁找铁钉+七步法
ELISA 到底怎么工作？一个比喻讲明白：磁铁找铁钉抗体是磁铁，抗原是铁钉，酶是报警器。磁铁抓住铁钉后装上报警器，加底物就会「响」（变色），颜色越深=铁钉越多！本质就两条：①抗原-抗体特异性结合（像钥匙开锁一样准）②酶催化显色（OD 值定量，颜色深浅和含量成正比）最常用的夹心法七步，连环画走一遍1️⃣ 包被：捕获
冰冻切片vs石蜡切片？一张决策卡不再纠结
刚取下来的组织，到底做冰冻还是石蜡？两者虽然都是把组织切成薄片，但样本处理方式、成像效果和适用实验并不相同！❄️ 冰冻切片：取材→OCT包埋→快速冷冻→切片，省去脱水浸蜡，制片快，对脂质、酶活性、天然荧光、温度敏感抗原的保留更有优势。适合：荧光蛋白原位观察、油红O脂质染色、部分免疫荧光、酶活性
蛋白纯化 4 大标签怎么选？优缺点一次说清
【开头钩子】His、GST、MBP、Strep……纯化标签到底选哪个？这条把 4 种常用标签的优缺点一次摆齐，选型不再纠结【内容概览】✅ His-tag：标签小、条件温和、产量大，但易氧化蛋白和膜蛋白要避开✅ GST-tag：洗脱温和保活性、适合 pull-down，可惜分子量大✅ MBP-tag & NusA：抗降解提水溶性，NusA 需与
Western Blot全流程一页通！11步+避坑警告
WB 新手直接抄！Western Blot 完整流程 11 步一页通，每步都标了翻车警告⚠1️⃣ 样品准备：冰上裂解（RIPA+蛋白酶抑制剂），12000-14000rpm 4℃离心取上清2️⃣ 蛋白定量：BCA/Bradford 做标准曲线，上样 20-60μg/孔3️⃣ 样品处理：4×上样缓冲液 95℃ 5-10min 变性4️⃣ SDS-PAGE 电泳：80V 浓缩胶 → 120-1
ROS检测翻车合集：避光没做好全白测
做氧化应激课题的姐妹看过来，DCFH-DA 荧光探针法一篇讲透原理一句话：脂溶性的 DCFH-DA 无荧光、能自由穿膜进细胞→被酯酶水解成亲水的 DCFH「困」在胞内→遇到 ROS（过氧化氢、羟自由基、过氧亚硝基阴离子等）被氧化成强绿色荧光的 DCF→测荧光就知道 ROS 水平。激发 ~488nm / 发射 ~525nm，荧光越强 ROS 越
炎症因子要不要做WB？7页讲透取舍逻辑
炎症因子有必要做 WB 吗？qPCR 和 ELISA 够吗？这可能是投稿前最纠结的问题——看完这篇不再犹豫先分清三个层次：qPCR 看 mRNA（转录水平）、ELISA 看分泌型成熟蛋白（最贴合炎症功能）、WB 看总蛋白（前体+成熟）✅ 只用 qPCR+ELISA 就够的场景（最常见）：TNF-α、IL-6、IL-1β 等分泌型因子，上清/血
流式细胞术染色 SOP，表面+胞内全步骤
【开头钩子】流式染色总是不知道先加染料还是先加抗体？表面染色两套方案 + 胞内染色全流程，每一步参数都标好了【内容概览】✅ 表面染色方案①：Phantom Dye 死活染料，10 步走完✅ 表面染色方案②：7-AAD 染料，只能染活细胞、染完迅速上机✅ 胞内染色：固定破膜分「胞内靶标」和「核内靶标」两条路✅ 关键参数：2-8&de
6 种 PCR 原理一次讲清，新手直接背
【开头钩子】巢式、半巢式、反转录巢式、荧光定量 PCR-FP……名字都听过，原理却说不上来？这条帮你一次理清【内容概览】✅ 常规巢式 PCR：两轮扩增 + 新引物，错误扩增概率极低✅ 半巢式 PCR：只能设计一条引物时的替代方案✅ 实时荧光定量 PCR-FP：靠偏振光变化实现定量检测✅ 序列特异性引物 PCR：引物与模
抗体配对避坑合集，5 张图讲透 WB/IHC/IF
【开头钩子】一抗二抗怎么配、封闭液怎么选、转膜条件怎么设、内参按什么挑？5 张图一次理清，新手照做不踩坑【内容概览】✅ 种属配对表：小鼠/兔/大鼠/山羊/绵羊/鸡 → 推荐二抗 + 常用标签✅ 显色检测：ECL vs 荧光 vs 酶底物显色，适用场景一表分清✅ 封闭液：别再无脑脱脂奶，磷酸化实验必须换 BSA✅ WB 转膜：湿
抗体怎么选？到底谁抗谁啊
【开头钩子】买抗体只看品牌和靶蛋白名称？难怪 WB 条带总是不对劲。下单前这 8 条逐条过一遍，能帮你省下不少冤枉钱。【内容概览】① 先看 Applications：厂家验证过哪些应用（WB / IF / ICC / IHC / IP / ChIP / FC），WB 认线性表位、IF/IP 认构象表位，WB 好用的抗体 IP 未必拉得下来② Species Reactivity：区分 Val
8 大组学一次分清，入门必存
【开头钩子】导师嘴里的基因组、转录组、代谢组……听起来都叫"组学"，到底差在哪？这份帖子一次帮你分清。【内容概览】覆盖 8 大组学：基因组学、转录组学、表观基因组学、蛋白质组学、代谢组学、脂质组学、微生物组学、多组学联合每个组学都列清 4 件事：研究对象是什么、主要研究哪些内容、常用技术有哪些
小鼠给药 i.g./i.p./i.v. 怎么打？一篇讲透
鼠鼠给药总翻车？剂量、深度、角度一次说清 （上篇：灌胃+五大注射）先认全 8 类给药方式：经口 p.o./灌胃 i.g.、皮下 s.c.、皮内 i.d.、肌肉 i.m.、腹腔 i.p.、静脉 i.v.、滴鼻、经皮 TDD、脊髓腔内、脑室内 i.c.v./鞘内、直肠内、关节腔内。灌胃 i.g.：靠灌胃针把药液直接灌进胃。头颈躯干一条直线防伤食道；插针深度
小鼠原代 BMSC 分离 15 步，照着做就行
【开头钩子】原代 BMSC 分离第一次上手不知从哪下手？解剖取腿到铺板培养，15 步一条时间线全走完，每步都给你标好了【内容概览】✅ 前处理：后腿预冷 PBS 清洗 → 剔除肌肉，无菌操作不马虎✅ 冲髓：分离胫骨股骨、剪开两端，PBS 冲到髓腔发白✅ 过滤离心：70 μm 筛网过滤，300g 两次离心拿干净沉淀✅ 收尾：红裂
多重免疫组化mIHC流程！27步从烤片到封片
多重免疫组化（mIHC）还不会做？以 Alpha Bas 试剂盒为例，FFPE 样本全流程 27 步整理好了准备：10% 中性福尔马林固定 8-48h 最佳，切片 3-4μm 防脱载玻片；工作液务必使用前半小时内配！预准备：60℃ 烤片 60min → 二甲苯脱蜡 ×3 → 梯度乙醇水化 → 微波抗原修复（预热5min-高火2min-低火15min）自
原代细胞传代红线表：超代次等于白养
养原代细胞的姐妹看过来！「这一代还能不能用」不用再翻说明书了，8 大类细胞推荐代次一次整理先搞清概念：一代（passage）= 一次完整传代操作周期（消化→离心→重新接种→下次传代前），不是细胞分裂次数！刚分离的叫 P0，传一次 P1、传两次 P2。代次越高越易丢失原组织表型、增殖力下降，所以「优先用 3-5
单细胞测序的聚类和注释，一篇给你讲明白
拿到 1 万个细胞 × 2 万基因的表达矩阵，直接懵？这篇把「聚类+注释」彻底讲透第一步·聚类=分堆：靠 Louvain、Leiden 算法，把表达模式相似的细胞归到一个簇，差异大的分开，最后生成那张熟悉的 UMAP/t-SNE「彩虹图」。但注意：此时每堆只有编号，还没有名字！第二步·注释=上户口：靠 Marker 基因认身份
单细胞测序跑完别停！湿实验验证四级晋级路线
单细胞测序做完，UMAP 画得再漂亮、Marker 基因列得再长，也只是生信预测——没有湿实验验证，到审稿人手里站不住脚！先想清楚要验证什么，核心就三件事：①分出来的亚群是不是真实存在 ②Marker 基因在真实组织里是不是高表达 ③预测的功能/轨迹/通讯是不是真的发生了然后按段位晋级基础必做（发文底线）：qPCR
流式圈门总翻车？四关顺序抄作业
圈门没有万能模板，但有一条稳定主线：先把不该进入分析的事件排掉，再回答目标细胞是谁、状态如何第一关 · 先去粘连：别把双联体、多联体当一个细胞统计。用 FSC-A 对 FSC-H 或 FSC-W，保留沿对角线排列的单细胞群；细胞周期实验常用 A/W 组合去双联体更彻底。核心判断：单个细胞面积和高度比例稳定，粘连体比例异
免疫组化IHC全流程，10步拆到手把手
IHC 总做不出漂亮结果？把这份「抗体探针染色」说明书收好原理一句话：利用抗原-抗体特异性结合，用标记抗体在组织切片上定位目标蛋白，显微镜下直接看位置和数量。主要材料：组织样本（石蜡/冷冻切片）｜一抗+HRP标记二抗+稀释液｜DAB显色液+苏木素｜抗原修复液、组化笔、PBS、封闭剂、梯度乙醇、二甲苯10 步流程（含
免疫组化全套protocol！13小步从切片到封片
一份能直接照着做的免疫组化完整 protocol，从切片到封片 13 小步全流程前处理：连续 3-4μm 切片 → 60℃ 烤片 1-2h → 过缸脱蜡水化（二甲苯 10min×3 → 梯度酒精各 5min）→ 微波抗原修复（低火5min-中火5min-高火10min，时间只多不少，降至室温静置≥2h）→ 3%H2O2 阻断 30min → 组