ELISA原理一讲就懂!磁铁找铁钉+七步法
ELISA 到底怎么工作?一个比喻讲明白:磁铁找铁钉抗体是磁铁,抗原是铁钉,酶是报警器。磁铁抓住铁钉后装上报警器,加底物就会「响」(变色),颜色越深=铁钉越多!本质就两条:①抗原-抗体特异性结合(像钥匙开锁一样准)②酶催化显色(OD 值定量,颜色深浅和含量成正比)最常用的夹心法七步,连环画走一遍1️⃣ 包被:捕获
ELISA 到底怎么工作?一个比喻讲明白:磁铁找铁钉
抗体是磁铁,抗原是铁钉,酶是报警器。磁铁抓住铁钉后装上报警器,加底物就会「响」(变色),颜色越深=铁钉越多!
本质就两条:①抗原-抗体特异性结合(像钥匙开锁一样准)②酶催化显色(OD 值定量,颜色深浅和含量成正比)
最常用的夹心法七步,连环画走一遍
1️⃣ 包被:捕获抗体铺板底 4℃ 过夜(铺好捕鼠夹)
2️⃣ 封闭:BSA/脱脂奶粉堵住空位防乱粘(减少假阳性)
3️⃣ 加样:目标蛋白被牢牢抓住(老鼠上钩)
4️⃣ 检测抗体:结合另一个位点,形成抗体-抗原-抗体三明治
5️⃣ 酶标二抗:装上 HRP 报警器
6️⃣ 显色:TMB 变蓝,蛋白越多颜色越深
7️⃣ 终止读数:硫酸终止变黄,450nm 读 OD,对照标准曲线算浓度✅
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