免疫组化全套protocol!13小步从切片到封片
一份能直接照着做的免疫组化完整 protocol,从切片到封片 13 小步全流程前处理:连续 3-4μm 切片 → 60℃ 烤片 1-2h → 过缸脱蜡水化(二甲苯 10min×3 → 梯度酒精各 5min)→ 微波抗原修复(低火5min-中火5min-高火10min,时间只多不少,降至室温静置≥2h)→ 3%H2O2 阻断 30min → 组
一份能直接照着做的免疫组化完整 protocol,从切片到封片 13 小步全流程
前处理:连续 3-4μm 切片 → 60℃ 烤片 1-2h → 过缸脱蜡水化(二甲苯 10min×3 → 梯度酒精各 5min)→ 微波抗原修复(低火5min-中火5min-高火10min,时间只多不少,降至室温静置≥2h)→ 3%H2O2 阻断 30min → 组化笔画圈 → 封闭 30min-1h
染色显色:一抗 4℃ 过夜(15h+)/常温 1h → 二抗 1:200~1:1000 常温 1h → DAB 显色计时观察 → 苏木素复染 3min → 盐酸酒精分化 1-3s 返蓝 → 过缸脱水透明 → 中性树胶封片
⭐ 洗涤贯穿全程:PBS/PBST/纯水 5min×3
试剂清单 12 项也帮你列好了(二甲苯/酒精/PBS/修复液/H2O2/封闭液/一抗/二抗/DAB/苏木素/盐酸酒精/中性树胶),开工前先清点!DAB 有致癌性,记得通风橱+手套
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