免疫组化IHC全流程，10步拆到手把手

IHC 总做不出漂亮结果？把这份「抗体探针染色」说明书收好

原理一句话：利用抗原-抗体特异性结合，用标记抗体在组织切片上定位目标蛋白，显微镜下直接看位置和数量。

主要材料：组织样本（石蜡/冷冻切片）｜一抗+HRP标记二抗+稀释液｜DAB显色液+苏木素｜抗原修复液、组化笔、PBS、封闭剂、梯度乙醇、二甲苯

10 步流程（含耗时）：
①样本制备与切片（4μm、42℃水浴展片）
②脱蜡与水化 1h10min（二甲苯Ⅰ/Ⅱ各20min+梯度乙醇）
③抗原修复 30-40min（高压121℃ 1.5-2min / 水煮95℃ 10-15min / 微波中火5+5min / 酶消化）
④内源性酶阻断 15min（3%双氧水避光10min）
⑤封闭 1h（3% BSA湿盒）
⑥一抗孵育 1h或4℃过夜（记得设阴性对照！）
⑦二抗孵育 35min（种属要匹配一抗）
⑧DAB显色 5min（致癌⚠️通风橱+手套）
⑨复染封片 1h（苏木素1.5-2min，脱水透明树胶封片）
⑩成像分析

高频翻车点：脱蜡不彻底（白斑块=二甲苯该换了）、切片干燥、二抗种属不匹配、DAB背景过深。有水珠别硬看，重新脱水透明再封片。

累计约5-6小时跑完全程，收藏当实验 SOP 用 ✅