帕金森热点 LRRK2，活性这样测才靠谱

做帕金森研究的小伙伴，对 LRRK2 肯定不陌生
这个激酶的致病突变（尤其 G2019S）和帕金森病强相关，而它最经典的"工作成果"，就是把 Rab10 的第 73 位苏氨酸磷酸化——pRab10 于是在溶酶体附近形成一个个清晰的小点，正好适合拿显微镜数一数。
今天这篇 STAR Protocols 给出了一套完整的高内涵成像流程，几个设计我觉得很值得抄作业
内源信号，不过表达
直接用 Lrrk2 G2019S 敲入小鼠的原代星形胶质细胞，测的是细胞自己的 pRab10，比过表达体系更贴近生理状态。
染色有讲究
MJF-R21 抗体 1:500 过夜；PFA 沿孔壁慢慢加；洗板温柔一点，不然星形胶质细胞容易掉。染色完放 4°C 含叠氮钠的 DPBS 里能存 3 周，但建议尽快拍。
成像参数可直接抄
40× 水浸物镜，每孔随机 29 个视野，Z 堆栈 7 层。外圈孔别种细胞，加 DPBS 当缓冲，不然边缘效应能让你数据翻车。
Harmony 自动分析是灵魂
高斯平滑定区域 → Hoechst 找核 → 滑动抛物线滤波把囊泡从背景里"抠"出来 → 按面积分级，0.3–3.5 μm² 的才算 pRab10 囊泡。全自动，减少人为数数的偏差。
两个经典应用
① LRRK2 抑制剂 MLi-2 剂量曲线，IC50 约 3 nM，和文献吻合；
② 溶酶体应激剂 LLOME 让囊泡数量飙升，加 MLi-2 又被拉回来，证明这是 LRRK2 依赖的过程。
整套流程搬去 RAW 264.7、A549 甚至 iPSC 来源的小胶质细胞都能用，换个细胞优化下参数就行。做 LRRK2 药理或机制研究的可以收藏了
参考文献：Masotti et al., STAR Protocols (2026) DOI: 10.1016/j.xpro.2026.104819（开放获取）