查自噬,LC3B 抗体这样挑不出错(人源/小鼠样品)
自噬实验大概是条带判读争议最多的领域之一。LC3B 在 WB 上是 I 型和 II 型两条带,II 型脂化后跑得快、在膜上富集。偏偏有的抗体只认一条,有的两条都认但亮度比例不靠谱,再加上阻断剂对照没做,文章返工的教训太多了。
LC3B(MAP1LC3B)是自噬体膜的标志性蛋白,胞质型 LC3-I 被 ATG7/ATG3 系统脂化成 LC3-II 后结合到自噬体膜上。LC3-II 的量和自噬体数量大致相关,算自噬检测的"金标准"之一。但单看 LC3-II 升高不等于自噬流增强,也可能是降解受阻,必须配 p62 和阻断剂对照。
这一组产品针对的抗原是 LC3B,反应种属:Human、Mouse、Rat。下面把各款的特点摊开讲。
各款特点,挨个说
proteintech 的 14600-1-AP(LC3 Polyclonal antibody),Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。
proteintech 这款 18725-1-AP,品名是 LC3B-Specific Polyclonal antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。
再看 abclonal 的 A19665:[KD Validated] LC3B Rabbit mAb,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IP。
到底怎么选?
选对 LC3-I/II 双带都验证过的产品,WB 上两条带(约 16 和 14 kDa)最好能清楚分开。样品处理要快并加抑制剂,LC3-II 对蛋白酶敏感。实验设计一定包含氯喹或巴弗洛霉素 A1 的阻断对照,不然结果没法解读。免疫荧光看 puncta 形成,抗体背景要低,点状信号才能数清楚。
相关产品列表
| 品牌 | 货号 | 品名 | 抗原名称 |
|---|---|---|---|
| proteintech | 14600-1-AP | LC3 Polyclonal antibody | LC3B |
| proteintech | 18725-1-AP | LC3B-Specific Polyclonal antibody | LC3B |
| abclonal | A19665 | [KD Validated] LC3B Rabbit mAb | LC3B |