二抗选不好一抗白搭:Rabbit IgG 选购指南(兔样品)
WB 曝光时一片黑、免疫荧光背景比信号还亮,这类翻车有一大半要算在二抗头上。兔源一抗是市面上最常见的宿主,对应二抗的货架也最长,可选多了反而挑花眼:HRP 还是荧光?要不要交叉吸附?轻重链怎么避开?
Rabbit IgG 二抗识别兔源一抗的恒定区,相当于给一抗接上检测系统,信噪比全看它。交叉吸附过的二抗和小鼠、人源 IgG 的交叉反应更低,适合多重染色。偶联方式(HRP、AP、荧光素)决定你是在做化学发光还是成像。
这一组产品针对的抗原是 Rabbit IgG,反应种属:Rabbit。下面把各款的特点摊开讲。
各款特点,挨个说
Abcam 的 Ab6721(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP)),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、Dot。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/20000。
Abcam 这款 Ab150077,品名是 Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF488,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/4000。
再看 Abcam 的 Ab205718:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IP。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/50000。
Abcam 的 Ab97051 值得单独说说——Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/20000。
接下来是 Abcam 的 Ab150080(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594)),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF594,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 的 Ab150073(Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488)),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF488,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/4000。
Abcam 这款 Ab150075,品名是 Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF647,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/4000。
再看 Abcam 的 Ab150079:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF647,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
Abcam 的 Ab7090 值得单独说说——Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) preadsorbed,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、Dot。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/10000。
接下来是 Abcam 的 Ab150078(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 555)),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF555,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
Abcam 的 Ab150081(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) preadsorbed),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF488,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/4000。
Abcam 这款 Ab150083,品名是 Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647) preadsorbed,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF647,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
再看 Abcam 的 Ab175471:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 568),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF568,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
Abcam 的 Ab97080 值得单独说说——Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP) preadsorbed,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/5000-1/50000。
接下来是 Abcam 的 Ab150076(Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594)),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF594,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 的 ab288151(HRP Anti-Rabbit IgG antibody),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/100000。
Abcam 这款 Ab150074,品名是 Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 555),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF555,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
再看 Abcam 的 Ab6720:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Biotin),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 Biotin,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、Dot。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/5000-1/20000。
Abcam 的 Ab6702 值得单独说说——Goat Anti-Rabbit IgG H&L,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IP。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000-1/5000。
接下来是 Abcam 的 Ab150084(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594) preadsorbed),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF594,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 的 Ab175470(Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 568)),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF568,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 这款 Ab150061,品名是 Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 488) preadsorbed,Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF488,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC、IF。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/4000。
再看 Abcam 的 Ab150064:Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594) preadsorbed,Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF594,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 的 Ab6802 值得单独说说——Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (HRP),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、Dot。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000-1/3000。
接下来是 Abcam 的 Ab191866(VHH Single Domain Anti-Rabbit IgG Fc (HRP)),Llama 来源,属单克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA。
Abcam 的 Ab150088(Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 594) preadsorbed),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF594,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 这款 Ab150062,品名是 Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 555) preadsorbed,Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF555,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
再看 Abcam 的 Ab99697:Mouse monoclonal [SB62a] Anti-Rabbit IgG light chain (HRP),Mouse / IgG2b 来源,属单克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/4000-1/8000。
Abcam 的 Ab214880 值得单独说说——Goat Anti-Rabbit IgG H&L (HRP polymer),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 IHC。
接下来是 Abcam 的 Ab175651(Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 405)),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF405,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
Abcam 的 Ab16284(Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (HRP)),Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 HRP,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000-1/20000。
Abcam 这款 Ab150086,品名是 Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 555) preadsorbed,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF555,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/200-1/1000。
再看 Abcam 的 Ab175652:Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 405),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF405,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/2000。
Abcam 的 Ab150063 值得单独说说——Donkey Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor® 647) preadsorbed,Donkey / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 AF647,验证应用覆盖 IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000-1/2000。
到底怎么选?
WB 常规用 HRP 标记的二抗,稀释比例按厂家推荐先试梯度。多重免疫荧光优先选交叉吸附(cross-adsorbed)规格,再把宿主种属错开。做 IP 后的 WB 要留意轻链干扰,片段化或轻链特异的二抗能避开。多色 WB 可以考虑近红外通道,串色比可见光少。