GFP 抗体横评:检测和纯化各有分工

GFP 抗体横评:检测和纯化各有分工

GFP 融合蛋白做得顺的时候,荧光就是最好的报告;可一旦要做 WB 验证、免疫沉淀,或者荧光被固定剂淬灭了,还是得靠抗体。抗 GFP 抗体和“看荧光”是两套逻辑,有的擅长检测变性蛋白,有的认天然构象,买错了纯化和检测两头不落好。

GFP 来自水母的绿色荧光蛋白,作为融合标签广泛用于蛋白定位、表达和纯化。抗 GFP 抗体识别的是蛋白本身而不是荧光基团,荧光丢失(变性、固定、突变)后依然能检测。部分产品还能识别近缘变体,覆盖范围以厂家的交叉反应数据为准。

Abcam Ab13970
图:Abcam Ab13970 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
Abcam Ab13970
图:Abcam Ab13970 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
Abcam Ab290
图:Abcam Ab290 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
Abcam Ab290
图:Abcam Ab290 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页

这一组产品针对的抗原是 GFP,反应种属:标签蛋白(无特定反应种属限制)。下面把各款的特点摊开讲。

各款特点,挨个说

Abcam 的 Ab13970(Anti-GFP antibody),Chicken / IgY 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IF/ICC。

Abcam 这款 Ab290,品名是 Anti-GFP antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IF-FRO。

再看 Abcam 的 Ab6556:Anti-GFP antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、FCM、IF/ICC、IP。

Abcam 的 Ab6673 值得单独说说——Anti-GFP antibody,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IP。

接下来是 Abcam 的 Ab1218(Anti-GFP antibody [9F9.F9]),Mouse / IgG1 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/3000-1/30000。

Abcam 的 Ab5450(Anti-GFP antibody),Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、IF/ICC、IF-FRO、IP。

Abcam 这款 Ab6662,品名是 FITC Anti-GFP antibody,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 FITC,验证应用覆盖 WB、IHC、IF/ICC、IF-FRO、Dot。

再看 Abcam 的 Ab183734:Anti-GFP antibody [EPR14104],Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、FCM、IF/ICC。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/10000-1/50000。

Abcam 的 Ab6658 值得单独说说——Biotin Anti-GFP antibody,Goat / IgG 来源,属多克隆抗体,标记形式为 Biotin,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IP。

接下来是 Abcam 的 Ab32146(Anti-GFP antibody [E385]),Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000-1/20000。

到底怎么选?

WB 选识别变性 GFP 的抗体,融合蛋白条带按插入片段的大小算。IP 或检测天然复合物,挑标注 native 或有 IP 验证的克隆。荧光被福尔马林淬灭的石蜡切片,抗体染色是找回信号的办法,选 IHC 验证的产品。做双标时注意和内源荧光通道的区分,必要时换红移变体的抗体。

相关产品列表

品牌 货号 品名 抗原名称
Abcam Ab13970 Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab290 Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab6556 Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab6673 Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab1218 Anti-GFP antibody [9F9.F9] GFP
Abcam Ab5450 Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab6662 FITC Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab183734 Anti-GFP antibody [EPR14104] GFP
Abcam Ab6658 Biotin Anti-GFP antibody GFP
Abcam Ab32146 Anti-GFP antibody [E385] GFP

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