1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Circular RNAs in cancer immunotherapy: mechanisms, biomarkers, and therapeutic approaches；发表期刊：European Journal of Clinical Investigation；影响因子：5.7（2024年）；研究领域：肿瘤免疫治疗、非编码RNA研究
肿瘤免疫治疗是当前肿瘤学研究的核心方向之一，其发展关键节点包括2011年首个CTLA-4抑制剂获批上市，开启免疫检查点阻断治疗时代；2014年PD-1抑制剂获批，显著延长多种晚期肿瘤患者生存期；2017年CAR-T细胞疗法获批，为血液系统恶性肿瘤带来突破性治疗方案。当前研究热点集中在克服免疫治疗耐药、开发新型免疫治疗靶点、寻找精准的疗效预测/预后生物标志物、优化CAR-T等治疗的安全性与持久性。然而，领域内仍存在诸多未解决的核心问题，如免疫检查点阻断治疗的响应率普遍较低（多数肿瘤不足30%）、耐药机制复杂且尚未完全阐明、缺乏可用于早期诊断和预后分层的特异性生物标志物、现有mRNA载体的CAR-T疗法存在疗效持续时间短的缺陷。环状RNA（circRNA）作为一类具有共价闭合环状结构的非编码RNA，具有高度稳定性、组织特异性表达等特性，其在肿瘤中的异常表达与肿瘤发生发展及免疫微环境调控密切相关，为解决上述领域痛点提供了新的方向，成为肿瘤免疫治疗领域的研究新热点。
2. 文献综述解析
本综述系统整合了circRNA的生物发生机制、在肿瘤进展中的功能、在肿瘤免疫治疗中的调控作用与应用潜力，以及作为生物标志物的临床价值，全面梳理了该领域的最新研究进展，并指出了临床转化面临的挑战与未来方向。
作者的综述逻辑按照“基础特性-功能机制-肿瘤进展调控-免疫治疗应用-临床转化价值-局限性”的学术框架展开，先明确circRNA的生成过程与分类，再从分子机制层面阐述其功能，进而延伸至肿瘤进展的核心hallmark，聚焦于免疫治疗这一前沿领域，最后探讨其临床转化潜力与挑战。现有研究已明确circRNA具有多种核心功能机制，包括作为miRNA海绵调控下游基因表达、与蛋白质相互作用调控信号通路、作为蛋白支架促进复合物形成、编码功能性多肽、调控转录与翻译过程等，这些机制在肿瘤的基因组不稳定、血管生成、转移、干细胞特性维持、化疗耐药等环节均发挥关键作用；在免疫治疗领域，现有研究已发现circRNA可调控免疫检查点的稳定性与表达、参与细胞因子信号通路调控、可作为肿瘤疫苗的新抗原来源、可作为CAR-T疗法的新型稳定载体。但现有研究仍存在诸多局限性，如circRNA的调控网络极为复杂，多数circRNA的具体靶标与上下游调控关系尚未明确，缺乏肿瘤特异性的circRNA分子，临床转化研究处于早期阶段，circRNA的体内递送效率与特异性仍需提升。本综述的创新价值在于首次系统且全面地将circRNA的基础研究与肿瘤免疫治疗的临床应用相结合，为该领域的研究提供了清晰的学术框架，同时明确了临床转化的核心障碍，为后续研究指明了方向。
3. 研究思路总结与详细解析
本综述作为系统性研究总结，整体研究目标是全面梳理circRNA在肿瘤免疫治疗领域的研究进展，核心科学问题是阐明circRNA调控肿瘤免疫微环境与免疫治疗响应的机制，以及其作为生物标志物与治疗工具的潜力，技术路线遵循“基础特性解析-功能机制阐述-疾病进程调控-临床应用探索-转化挑战分析”的逻辑闭环。
3.1 circRNA的生物发生与分类解析
实验目的：明确circRNA的生成过程与分类体系，为后续功能研究奠定基础。
方法细节：总结现有研究提出的两种circRNA生成模型，即直接反向剪接模型与套索中间体模型（包含外显子跳跃和内含子套索逃避去分支两个亚型），并基于生成过程与组成成分对circRNA进行分类。
结果解读：如图1所示，circRNA由前体mRNA通过反向剪接生成，相较于经典剪接效率较低；直接反向剪接模型中，外显子2与外显子3先发生反向剪接形成外显子-内含子circRNA（EIciRNA），再经经典剪接形成外显子circRNA（EcircRNA）；套索中间体模型中，外显子跳跃模型保留内含子1和3，需额外经典剪接步骤生成EIciRNA，而内含子套索逃避去分支模型则是内含子套索前体逃避经典线性剪接的去分支步骤，形成内含子circRNA（ciRNA）；最终circRNA分为EcircRNA、ciRNA、EIciRNA三类。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、RNA测序（RNA-seq）、核质分离等实验技术及相关试剂/仪器。
3.2 circRNA功能机制解析
实验目的：系统梳理circRNA在肿瘤中的核心功能机制，明确其参与肿瘤调控的分子路径。
方法细节：通过分类总结现有研究，将circRNA的功能机制分为六大类，分别阐述每类机制的具体作用模式并结合代表性研究案例进行说明。
结果解读：circRNA的核心功能机制包括：一是作为miRNA海绵，通过结合miRNA阻断其对靶mRNA的抑制作用，如circACVR2A结合miR-511-5p，解除其对PI3K信号通路的抑制，从而抑制肝癌细胞增殖与转移；二是与蛋白质相互作用，通过结合特定蛋白质调控其稳定性或功能，如circNFIB与MEK1竞争性结合，诱导MEK1与ERK2解离，抑制ERK信号通路，从而抑制肝内胆管癌细胞增殖与转移；三是作为蛋白支架，通过多个蛋白结合位点促进蛋白质复合物形成，如circPOLR2A同时结合UBE3C与PEBP1，促进PEBP1的泛素化降解，激活ERK通路，促进肾透明细胞癌进展；四是作为翻译模板，部分含IRES序列或m6A修饰的circRNA可编码功能性多肽，如circTRIM编码TRIM1-269aa多肽，促进三阴性乳腺癌的化疗耐药与转移；五是调控翻译，通过结合mRNA或翻译起始因子调控翻译过程，如circYap结合Yap mRNA及eIF4G、PABP，抑制Yap翻译起始；六是调控转录，通过结合启动子或招募转录调控蛋白调控基因转录，如circREEP3招募染色质重塑因子CHD7，启动FKBP10转录，促进结直肠癌进展。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用RNA免疫沉淀（RIP）、染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫印迹（WB）等实验技术及相关试剂/仪器。
3.3 circRNA在肿瘤进展hallmark中的作用解析
实验目的：阐述circRNA在肿瘤发生发展各关键环节的调控作用，明确其与肿瘤核心hallmark的关联。
方法细节：按照肿瘤进展的核心hallmark分类，分别总结circRNA在基因组不稳定与突变、血管生成、转移、干细胞特性维持、化疗耐药中的调控作用。
结果解读：如图2所示，circRNA参与肿瘤进展的多个核心环节：在基因组不稳定与突变方面，circMLL(9,10)可与DNA形成circR环，导致转录暂停与蛋白酶体抑制，引发DNA双链断裂与致癌易位，加速白血病发生；在血管生成方面，circTUBGCP4通过结合miR-146b-3p上调PDK2表达，激活Akt信号通路，促进结直肠癌来源外泌体诱导的血管内皮细胞迁移与管形成；在转移方面，缺氧诱导的外泌体circPLEKHM1可增强PABPC1与eIF4G的相互作用，促进OSMR翻译，诱导巨噬细胞向M2型极化，促进非小细胞肺癌转移；在干细胞特性维持方面，circRREB1与YBX1相互作用促进其核转位，激活WNT7B转录与Wnt/β-catenin通路，维持胰腺导管腺癌干细胞特性；在化疗耐药方面，circATG4B编码circATG4B-222aa多肽，与TMED10竞争性结合，阻止其与ATG4B结合，增强自噬，导致结直肠癌奥沙利铂耐药。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用细胞迁移实验、管形成实验、肿瘤干细胞球形成实验、药物敏感性实验等实验技术及相关试剂/仪器。
3.4 circRNA在肿瘤免疫治疗中的应用解析
实验目的：总结circRNA在肿瘤免疫治疗各领域的调控作用与应用潜力，探索其作为新型免疫治疗工具的可能性。
方法细节：分免疫检查点阻断、细胞因子调控、肿瘤疫苗、CAR-T疗法四个部分，分别梳理circRNA的作用机制与研究进展。
结果解读：在免疫检查点阻断方面，circCCAR1可直接结合PD-1，阻止其泛素化降解，同时其宿主基因CCAR1与β-catenin相互作用上调PD-L1表达，削弱肝癌的免疫应答；敲低circPIAS1可显著提高PD-1抑制剂的疗效。在细胞因子调控方面，circANAPC7通过CREB-miR-373-PHLPP2轴降低AKT磷酸化水平，减少TGF-β表达，抑制胰腺癌进展；circGGNBP2编码的cGGNBP2-184aa多肽可磷酸化STAT3，形成IL-6/cGGNBP2-184aa/STAT3正反馈环，维持肝内胆管癌的免疫抑制微环境。在肿瘤疫苗方面，circRNA编码的新抗原具有免疫原性，可诱导肿瘤特异性T细胞应答，circRNA疫苗相较于线性mRNA疫苗具有更高稳定性，可显著延长荷瘤小鼠生存期且无明显毒副作用。在CAR-T疗法方面，环状mRNA（cmRNA）作为CAR的表达载体，相较于线性mRNA具有更高稳定性，可延长CAR在T细胞上的表达时间，增强细胞毒性；Orna Therapeutics开发的oRNA技术可实现体内原位CAR-T表达，具有良好的生物分布与安全性。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用流式细胞术、酶联免疫吸附试验（ELISA）、动物异种移植模型等实验技术及相关试剂/仪器。
3.5 circRNA作为生物标志物的研究解析
实验目的：分析circRNA作为肿瘤诊断与预后生物标志物的临床价值，探索其在液体活检中的应用潜力。
方法细节：分诊断标志物与预后标志物两个部分，总结现有临床研究的结果与数据。
结果解读：在诊断方面，由5种circRNA组成的面板在胰腺导管腺癌（PDAC）的诊断中表现出高准确性，训练与验证队列的ROC曲线下面积（AUC）均较高，尤其在早期PDAC诊断中优势显著；该面板与CA19-9联合检测可显著提高诊断效率，有效识别CA19-9阴性的PDAC患者。在预后方面，circFOXK2在肝癌组织中高表达，与患者根治性肝切除术后的总生存期与无病生存期缩短相关（文献未明确提供HR值与P值，基于图表趋势推测）；血清外泌体circPDK1水平与胰腺癌的侵袭性临床病理特征相关，是患者不良生存的独立预后因素（文献未明确提供HR值与P值，基于图表趋势推测）。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、液相芯片、外泌体分离等实验技术及相关试剂/仪器。
4. Biomarker研究及发现成果解析
本综述中涉及的Biomarker类型为环状RNA（circRNA），其筛选与验证逻辑遵循“差异表达筛选-功能验证-临床样本验证”的链条，来源包括肿瘤组织、血清外泌体等，具有高稳定性、组织特异性等优势，在肿瘤诊断与预后分层中具有重要临床价值。
Biomarker定位：本综述中涉及的circRNA生物标志物涵盖诊断与预后两类，筛选逻辑主要基于肿瘤组织与正常组织的差异表达分析，部分结合公共数据库筛选，验证逻辑包括细胞系与动物模型的功能验证，以及大样本临床队列的验证。研究过程详述：诊断标志物方面，PDAC的circRNA面板来源于临床组织样本，通过qRT-PCR定量检测其表达水平，验证方法包括训练队列与独立验证队列的ROC曲线分析，其特异性与敏感性数据表现为AUC值在训练队列与验证队列中均较高，早期PDAC诊断的AUC值显著高于传统标志物CA19-9；预后标志物方面，circFOXK2的验证方法包括肝癌组织样本的免疫组化（IHC）与qRT-PCR检测，临床预后分析显示其高表达患者的总生存期显著缩短；血清外泌体circPDK1通过qRT-PCR检测，其水平与胰腺癌的肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理特征相关。核心成果提炼：这些circRNA生物标志物的功能关联包括：PDAC的circRNA面板可用于早期诊断，弥补传统标志物的不足；circFOXK2通过调控Warburg效应与miRNA海绵功能促进肝癌进展，可作为肝癌的预后标志物与治疗靶点；外泌体circPDK1可用于胰腺癌的非侵入性预后分层。其创新性在于首次系统总结了circRNA作为肿瘤生物标志物的临床研究进展，明确了其在液体活检中的应用潜力，为肿瘤的早期诊断与精准预后分层提供了新的工具。