缺氧研究 HIF-1α:样品处理是成败关键(人源样品)

缺氧研究 HIF-1α:样品处理是成败关键(人源样品)

HIF-1α 大概是最"娇气"的转录因子之一:常氧下几分钟就被降解干净,样品处理稍慢一点就什么都测不到。有人跑 WB 一片空白以为自己细胞不行,其实是裂解慢了半分钟。抗体灵敏度不够的话,缺氧刺激做得再好也白搭。

HIF-1α 是缺氧应答的主调控转录因子,常氧下被 PHD 羟化后经 VHL 途径泛素化降解;缺氧时稳定入核,和 HIF-1β 二聚化后启动 VEGF、GLUT1、LDHA 等靶基因。它在肿瘤、缺血、高原医学里都是核心指标。WB 约 120 kDa,样品新鲜度直接决定成败。

Abcam Ab51608
图:Abcam Ab51608 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
Abcam Ab51608
图:Abcam Ab51608 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
proteintech 20960-1-AP
图:proteintech 20960-1-AP 应用验证图|图源:proteintech 官方产品页
proteintech 20960-1-AP
图:proteintech 20960-1-AP 应用验证图|图源:proteintech 官方产品页

这一组产品针对的抗原是 HIF1A,反应种属:Human。下面把各款的特点摊开讲。

各款特点,挨个说

Abcam 的 Ab51608(Anti-HIF-1 alpha antibody [EP1215Y]),Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、FCM、IF/ICC、IP。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/100-1/1000。

proteintech 这款 20960-1-AP,品名是 HIF-1 alpha Polyclonal antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IP。

再看 Abcam 的 Ab16066:Anti-HIF-1 alpha antibody [mgc3],Mouse / IgG1 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、FCM。

到底怎么选?

样品处理要快:缺氧取出后立即加抑制剂裂解,最好全程冰上操作。WB 选灵敏度高、对人和小鼠样品都验证过的产品。IHC 看组织缺氧区域,石蜡切片需要优化抗原修复。阳性对照用氯化钴或去铁胺处理细胞最省事。做下游机制,HIF 靶基因(CA9、GLUT1)的 qPCR 或 IHC 是好的替代读出。

相关产品列表

品牌 货号 品名 抗原名称
Abcam Ab51608 Anti-HIF-1 alpha antibody [EP1215Y] HIF1A
proteintech 20960-1-AP HIF-1 alpha Polyclonal antibody HIF1A
Abcam Ab16066 Anti-HIF-1 alpha antibody [mgc3] HIF1A

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