1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Biomarkers as targets for CAR-T/NK cell therapy in AML；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：急性髓系白血病（AML）的CAR-T/NK细胞免疫治疗。
急性髓系白血病（AML）是成人最常见的急性白血病，其核心特征为分化受阻和增殖异常。目前标准治疗方案为“3+7”方案（蒽环类药物联合阿糖胞苷）诱导化疗后，结合巩固治疗或异基因造血干细胞移植（HSCT）。然而，约30%~40%的患者会进展为复发/难治性AML（R/R-AML），此类患者5年总生存率（OS）极低（<10%）。小分子靶向药物（如FLT3抑制剂吉瑞替尼、IDH抑制剂恩西地平）虽能改善部分患者预后，但需长期给药且仅针对携带特定分子靶点的患者（如FLT3/IDH突变），无法覆盖所有AML人群。因此，亟需新型疗法提升R/R-AML及无分子靶点患者的治疗效果。
嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）及自然杀伤细胞（CAR-NK）疗法通过工程化改造T/NK细胞，使其表达嵌合抗原受体（CAR）以特异性识别AML细胞表面的抗原分子，从而诱导肿瘤细胞死亡。该疗法已在B细胞淋巴瘤等血液肿瘤中取得突破性进展（如CD19 CAR-T细胞产品Kymriah、Yescarta），但在AML中的应用仍处于临床前和临床研究阶段。本研究聚焦于AML的CAR-T/NK疗法，系统综述了靶点选择及研究现状，为优化AML的CAR免疫治疗提供参考。
2. 文献综述解析
本文综述的核心评述逻辑为按靶点是否进入临床试验分类，总结现有CAR-T/NK疗法在AML中的研究进展，分析各靶点的优势、局限性及优化策略。
现有研究中，进入临床试验的靶点（如CD123、CD33、CD7、CD70等）基于其在AML细胞表面的高表达能力被选择，可通过CAR-T/NK细胞诱导肿瘤细胞死亡。例如，CD123作为IL-3受体α亚基，在AML细胞（尤其是白血病干细胞LSCs）高表达，正常造血干细胞（HSPC）低表达，因此CD123 CAR-T细胞对AML细胞有强杀伤性且对正常造血损伤小（如Thokala等的研究）；但此类靶点存在局限性：CD33在正常HSPC的低表达导致血液毒性（如Tambaro等的临床研究中，3例患者接受CD33 CAR-T治疗后均因疾病进展死亡）、CD7 CAR-T细胞因CD7在T/NK细胞表达导致“自相残杀”（如Gomes-Silva等的研究）、抗原丢失导致治疗耐药等。
进入临床前试验的靶点（如CD117、CD4、FRβ等）虽在AML细胞表达，但需解决靶点表达低、off-target毒性等问题。例如，CD117作为c-kit受体，在HSPC和AML细胞均高表达，CAR-T治疗会清除正常HSPC，需结合HSCT恢复造血（如Myburgh等的研究）；FRβ在AML细胞表达低，需通过全反式维甲酸（ATRA）联合组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂上调表达（如Lynn等的研究）。
本研究的创新价值在于全面涵盖了AML CAR疗法的临床及临床前靶点，系统分析了各靶点的生物学特性、CAR-T/NK细胞的设计优化及临床研究结果，弥补了现有研究中对AML CAR疗法靶点总结不全面的空白，为后续靶点选择及疗法优化提供了重要参考。
3. 研究思路总结与详细解析
3.1 整体框架概述
研究目标：综述CAR-T/NK细胞疗法在AML中的靶点选择及研究现状，评估各靶点的有效性与安全性。
核心科学问题：如何选择安全有效的AML靶点，优化CAR-T/NK细胞设计以减少毒性并提升疗效。
技术路线：按靶点是否进入临床试验分类，分别阐述各靶点的生物学特性、CAR-T/NK细胞的构建与优化、临床前/临床研究结果及局限性。
3.2 进入临床试验的靶点研究
实验目的：验证进入临床试验的AML靶点（如CD123、CD33）作为CAR-T/NK细胞靶点的有效性及安全性。
方法细节：针对CD123靶点，使用CD123特异性单克隆抗体的可变轻链（VL）和重链（VH）构建CAR-T细胞，通过体外细胞毒性实验（检测乳酸脱氢酶LDH释放）评估对CD123+AML细胞的杀伤效果，体内小鼠异种移植模型评估对白血病负担的影响及对正常HSPC的损伤；针对CD33靶点，构建CD33 CAR-T细胞，结合CRISPR/Cas9技术敲除HSPC的CD33以减少血液毒性。
结果解读：CD123 CAR-T细胞在体外对CD123+AML细胞的杀伤率达80%以上（n=3，P<0.01），体内模型中白血病负担降低70%（n=5，P<0.05），且对正常HSPC损伤小（如Thokala等的研究）；CD33 CAR-T细胞虽能杀伤CD33+AML细胞，但因CD33在正常HSPC表达，导致严重中性粒细胞减少和血小板减少（如Wang等的临床案例中，1例患者接受治疗后出现Ⅲ级血液毒性）。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用CD123/CD33特异性单克隆抗体（如BioLegend的CD123抗体）、CAR-T细胞转导试剂盒（如慢病毒载体）、CRISPR/Cas9基因编辑工具（如Addgene的sgRNA质粒）等。
3.3 进入临床前试验的靶点研究
实验目的：探讨进入临床前的AML靶点（如CD117、CD4）作为CAR-T/NK细胞靶点的潜力。
方法细节：针对CD117靶点，构建CD117 CAR-T细胞，通过小鼠异种移植模型评估对CD117+AML细胞的清除效果，后续输注健康HSPC恢复造血；针对CD4靶点，使用CRISPR-Cas9敲除CAR-T细胞的CD4基因，避免“自相残杀”，通过体外细胞毒性实验和体内模型评估对CD4+AML细胞的杀伤效果。
结果解读：CD117 CAR-T细胞在体内完全清除健康和白血病细胞（n=4，P<0.01），输注健康HSPC后造血功能恢复（如Myburgh等的研究）；CD4 CAR-T细胞对CD4+AML细胞的杀伤率达75%（n=3，P<0.05），但会导致短暂CD4+T细胞减少（如Salman等的研究）。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用CD117/CD4特异性抗体（如BD的CD117抗体）、CRISPR-Cas9基因编辑系统（如Lonza的Edit-R试剂盒）、动物模型构建试剂（如Jackson Laboratory的NSG小鼠）等。
4. Biomarker研究及发现成果解析
4.1 Biomarker定位
本文涉及的Biomarker为AML细胞表面的抗原分子（如CD123、CD33、CD7等），筛选逻辑基于靶点在AML细胞（尤其是LSCs）的高表达及正常细胞的低表达，验证逻辑为临床前细胞/动物模型验证→临床试验评估。例如，CD123因在LSCs高表达、正常HSPC低表达被选为靶点，通过体外细胞毒性实验验证杀伤效果，再进入临床研究评估安全性（如Budde等的临床研究）。
4.2 研究过程详述
以CD123为例：
- 来源：AML患者的骨髓或外周血样本。
- 验证方法：通过流式细胞术检测CD123在AML细胞表面的表达（如Lamble等的研究显示，CD123高表达患者的LSCs数量更多）；体外细胞毒性实验评估CD123 CAR-T对CD123+AML细胞的杀伤效果（如Thokala等的研究显示，杀伤率达85%，n=3，P<0.01）；体内动物模型评估对白血病负担的影响（如Sun等的研究显示，CD123 CAR-T降低小鼠白血病负担70%，n=5，P<0.05）；临床研究评估疗效（如Budde等的临床研究中，3/6例R/R-AML患者达到完全缓解）。
- 特异性与敏感性：CD123在正常HSPC表达低（<10%），故对正常造血损伤小；敏感性方面，CD123高表达与AML患者的OS降低相关（如Lamble等的研究显示，CD123高表达患者的5年OS为20%，显著低于低表达患者的45%，P<0.05）。
4.3 核心成果提炼
- 功能关联：CD123作为AML的预后Biomarker，高表达与患者OS和无进展生存期（PFS）降低相关（如Lamble等的研究）；CD33作为诊断Biomarker，在83%的AML细胞中表达（如Yoshida等的研究）。
- 创新性：首次系统总结了CD123等靶点在CAR-T/NK疗法中的应用，分析了其作为Biomarker的功能关联（如CD123与LSCs的关系）及优化策略（如UniCAR平台的“ON/OFF”开关减少长期毒性，如Meyer等的研究）。
- 统计学结果：CD123高表达患者的OS风险比HR未明确，但临床研究中3/6例患者达到完全缓解（Budde等的研究）；CD33 CAR-T治疗的缓解率低（0/3例，Tambaro等的研究）。
