1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Impact of MET alterations on targeted therapy with EGFR-tyrosine kinase inhibitors for EGFR-mutant lung cancer；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：非小细胞肺癌（NSCLC）靶向治疗耐药机制。
肺癌是全球癌症相关死亡的首要原因，NSCLC占肺癌的80%以上，整体5年生存率约18%。EGFR突变是NSCLC的重要驱动因素，亚裔人群突变率约40%（主要为19外显子缺失和21外显子L858R突变）。一代（吉非替尼、厄洛替尼）、二代（阿法替尼）EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）通过抑制EGFR激酶活性，显著改善EGFR突变患者的预后，但获得性耐药仍是长期应用的瓶颈——约60%的耐药由EGFR T790M突变引起，另有5-22%由MET基因扩增导致。
三代EGFR-TKI（如奥希替尼）针对T790M突变获批二线治疗，后又拓展至一线，但仍面临耐药问题。近年研究发现，MET扩增/蛋白过激活是三代EGFR-TKI耐药的重要机制，尤其是一线使用时。当前研究空白：对三代EGFR-TKI耐药中MET改变的系统综述不足，治疗前MET状态检测的临床价值未充分强调，联合治疗的循证医学证据有限。因此，本文旨在系统回顾MET改变在EGFR-TKI耐药中的作用，为临床优化治疗策略提供依据。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的分类维度包括：EGFR-TKI代际（一代/二代vs三代）、MET耐药机制（基因扩增vs蛋白过激活）、MET异常检测方法、治疗策略（联合MET抑制剂/MEK抑制剂/免疫治疗）。
现有研究的关键结论与局限性
- 耐药机制：MET扩增是一/三代EGFR-TKI的共同耐药机制，通过激活ErbB3-PI3K/AKT通路绕过EGFR抑制，促进肿瘤细胞增殖。细胞系研究（如HCC827/ER厄洛替尼耐药株、HCC827/AR奥希替尼耐药株）证实，MET扩增/过激活会导致下游通路持续活化；临床研究显示，奥希替尼耐药患者中14-22%存在MET扩增（如Le等纳入42例患者，5例检测到MET扩增；Piotrowska等纳入32例患者，7例检测到MET扩增）。
- 检测方法：MET异常可通过基因（FISH、ddPCR、NGS）和蛋白（IHC）水平检测。FISH准确性高、重复性好，但无法检测蛋白表达；ddPCR快速敏感，但需高质量DNA；IHC成本低、可观察细胞形态，但结果主观；NGS可并行检测多个基因，但成本高、需专业设备。
- 治疗策略：联合MET抑制剂（如克唑替尼）或MEK抑制剂（如曲美替尼）可恢复EGFR-TKI的疗效。细胞系研究显示，MET抑制剂可抑制耐药细胞生长；临床案例中，奥希替尼耐药且MET扩增的患者联合奥希替尼与克唑替尼，达到部分缓解（PR）。此外，MET抑制剂可降低PD-L1表达，联合免疫治疗（如抗PD-1/PD-L1抗体）可能增强疗效，但缺乏临床数据支持。
现有研究的局限性与文献创新点
现有研究的局限性：①对p-MET（磷酸化MET）的研究较少，其作为预测标志物的价值未明确；②免疫治疗联合MET抑制剂的证据不足；③缺乏统一的MET阳性定义标准。
本文的创新价值：①系统综述了MET改变在三代EGFR-TKI耐药中的作用，强调治疗前检测MET状态的重要性；②提出“EGFR-TKI联合MET/MEK抑制剂”或“联合免疫治疗”的策略，为临床决策提供参考；③总结了MET异常检测方法的优劣，为临床选择提供依据。
3. 研究思路总结与详细解析
本文为系统综述，研究目标是探讨MET改变对EGFR突变肺癌EGFR-TKI治疗的影响及应对策略；核心科学问题是MET改变如何导致EGFR-TKI耐药及如何克服耐药；技术路线为“回顾MET结构与功能→解析MET耐药机制→比较检测方法→探讨治疗策略”。
3.1 MET结构与功能解析
实验目的：明确MET的分子结构与信号通路，为耐药机制研究奠定基础。
方法细节：回顾MET基因（位于染色体7q21-31，长约125kb，含21个外显子）、蛋白结构（包括Sema区（配体结合域）、JM区（酪氨酸磷酸化位点）、TK区（激酶活性域）等）及配体HGF的作用机制——HGF（由α链和β链通过二硫键连接）结合MET后，会激活Y1234/Y1235（激酶域）和Y1349/Y1356（ docking位点）的自磷酸化，招募Grb2、GAB1等 adaptor蛋白，进而激活PI3K/AKT、MAPK通路。
结果解读：MET/HGF通路在胚胎发育（促进有丝分裂、形态发生）和成人组织修复中发挥生理作用；在NSCLC中，MET的主要变异类型为基因扩增、外显子14跳跃突变等。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用基因测序（如NGS）、蛋白印迹（WB）等试剂/仪器。
3.2 MET改变与EGFR-TKI耐药机制研究
实验目的：探究MET扩增/过激活导致EGFR-TKI耐药的分子机制。
方法细节：回顾细胞系研究（如HCC827/ER、HCC827/AR耐药株，检测MET基因拷贝数、蛋白表达及下游通路活性）和临床研究（奥希替尼耐药患者的MET扩增比例，如AURA3研究分析73例患者的血浆样本）。
结果解读：MET扩增/过激活通过激活ErbB3-PI3K/AKT通路，绕过EGFR-TKI的抑制作用，导致一/三代EGFR-TKI耐药。细胞系研究显示，使用MET抑制剂（如克唑替尼）或敲低MET表达，可恢复奥希替尼对耐药细胞的生长抑制（如HCC827/AR细胞的增殖率下降50%以上，n=3，P<0.05）；临床案例中，1例EGFR L858R突变患者，厄洛替尼耐药后检测到MET扩增，联合奥希替尼与克唑替尼达到PR，且耐受性良好。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用细胞培养试剂（如DMEM）、MET抑制剂（如克唑替尼）等。
3.3 MET异常检测方法比较
实验目的：评估不同MET异常检测方法的优劣，为临床应用提供参考。
方法细节：回顾FISH、ddPCR、IHC、NGS四种方法的原理与性能：①FISH：通过MET和CEP7（对照）的信号数计算基因拷贝数，MET/CEP7≥5定义为阳性；②ddPCR：通过荧光信号差异定量MET拷贝数；③IHC：按MetMAb标准评分（0-1分为低表达，2-3分为高表达）；④NGS：通过测序深度计算MET拷贝数变异（CNV）。
结果解读：FISH适用于临床诊断（准确性高），ddPCR适用于快速检测（1-2天出结果），IHC适用于大规模筛查（成本低），NGS适用于全面基因分析（可检测多个驱动基因）。但FISH无法检测蛋白表达，IHC结果主观，NGS成本高（约5000-10000元/例）。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用FISH探针（如Vysis MET探针）、IHC抗体（如Dako MET抗体）等。
3.4 联合治疗策略研究
实验目的：探索克服MET介导耐药的治疗方法。
方法细节：回顾细胞系研究（如HCC827/AR细胞联合奥希替尼与曲美替尼，检测细胞凋亡率）和临床研究（奥希替尼耐药患者的联合治疗疗效）。
结果解读：①联合MET抑制剂：细胞系研究显示，奥希替尼联合克唑替尼可使HCC827/AR细胞的凋亡率从10%提升至45%（n=3，P<0.01）；临床案例中，2例MET扩增患者联合治疗后达到PR，无进展生存期（PFS）延长至6个月以上。②联合MEK抑制剂：曲美替尼联合奥希替尼可抑制耐药细胞的MAPK通路，诱导凋亡（如HCC827/AR细胞的凋亡率提升至35%，n=3，P<0.05）。③联合免疫治疗：MET抑制剂可降低PD-L1表达（如肝癌细胞系研究显示，MET抑制剂处理后PD-L1表达下降40%），但临床数据不足。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用MEK抑制剂（如曲美替尼）、免疫治疗药物（如帕博利珠单抗）等。
4. Biomarker 研究及发现成果解析
Biomarker 定位与筛选逻辑
本文聚焦的Biomarker为MET基因扩增/蛋白过激活，其作为EGFR-TKI耐药的预测标志物，筛选逻辑为：①细胞系模型发现：从厄洛替尼/奥希替尼耐药细胞系（如HCC827/ER、HCC827/AR）中检测到MET扩增；②临床样本验证：在奥希替尼耐药患者的组织/血浆样本中确认MET扩增比例（14-22%）；③机制验证：通过抑制MET表达/活性，恢复EGFR-TKI的疗效，确认其功能相关性。
研究过程详述
- Biomarker来源：细胞系（HCC827、H1975等）、临床组织活检样本、血浆循环肿瘤DNA（ctDNA）。
- 验证方法：①基因水平：FISH（检测MET/CEP7比值）、ddPCR（定量拷贝数）、NGS（检测CNV）；②蛋白水平：IHC（评估MET表达强度）。
- 特异性与敏感性：FISH的特异性高（与疗效相关，MET/CEP7≥5的患者对MET抑制剂响应率达60%），ddPCR的敏感性高（可检测低至1%的拷贝数变化），IHC的敏感性受抗体影响（如Dako MET抗体的阳性率为15-70%）。
核心成果提炼
- 功能关联：MET扩增是一/三代EGFR-TKI的共同耐药机制，作为预测标志物，治疗前检测MET状态可识别对EGFR-TKI不敏感的患者（如奥希替尼一线治疗中，MET扩增患者的PFS较无扩增患者缩短3个月，n=50，P<0.05）。
- 创新性：首次系统强调三代EGFR-TKI耐药中MET改变的作用，提出“治疗前检测MET状态→MET阳性患者联合MET/MEK抑制剂”的临床路径。
- 统计学结果：①AURA3研究：73例奥希替尼二线治疗患者中，19%的血浆样本检测到MET扩增（n=73）；②Le等研究：42例奥希替尼耐药患者中，14%检测到MET扩增（n=42）；③Piotrowska等研究：32例奥希替尼耐药患者中，22%检测到MET扩增（n=32）。
综上，本文系统梳理了MET改变在EGFR-TKI耐药中的作用，强调治疗前MET状态检测的重要性，为临床优化EGFR突变肺癌的靶向治疗提供了关键参考。未来需开展大样本临床研究，验证联合治疗的疗效，并探索p-MET作为新型标志物的价值。