1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：The emerging landscape of exosomal CircRNAs in solid cancers and hematological malignancies；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：肿瘤学（外泌体非编码RNA与肿瘤进展）
环状RNA（circRNA）是一类共价闭合的内源性非编码RNA，1976年首次在RNA病毒中发现，早期被视为“剪接噪音”。直到2013年，随着RNA测序（RNA-seq）和生物信息学技术的发展，circRNA的功能被逐步揭示：可作为microRNA（miRNA）海绵（如CDR1as吸附miR-7）、调控基因转录（如ciRNA增强RNA聚合酶II活性）、与蛋白质相互作用（如circDnmt1结合P53），甚至通过内部核糖体进入位点（IRES）翻译为多肽。外泌体是细胞分泌的纳米级膜囊泡（30-100nm），通过携带DNA、RNA、蛋白质等 cargo 参与细胞间通讯，早期研究聚焦于miRNA和长链非编码RNA（lncRNA），但2015年首次在了你外泌体中发现circRNA后，外泌体circRNA成为肿瘤研究的新热点。
当前领域热点包括：外泌体circRNA在肿瘤微环境中的作用机制、作为肿瘤生物标志物的潜力；未解决的核心问题：1）外泌体circRNA在血液系统恶性肿瘤中的功能研究滞后（此前多关注实体癌）；2）circRNA翻译为蛋白质的机制在了你外泌体中的作用未明确；3）外泌体circRNA的清除与释放机制不清楚。
本文旨在系统总结外泌体circRNA在实体癌（如胰腺癌、肝癌）和血液系统恶性肿瘤（如急性髓系白血病、多发性骨髓瘤）中的作用机制，填补血液瘤研究的空白，并强调了外泌体circRNA作为肿瘤生物标志物和治疗靶点的潜力。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的分类维度包括：机制类型（miRNA海绵、蛋白质相互作用、翻译）、肿瘤类型（实体癌、血液系统恶性肿瘤）。
现有研究的关键结论与局限性
现有研究已证实：外泌体circRNA通过多种机制促进肿瘤进展——1）miRNA海绵效应：如胰腺导管腺癌（PDAC）中的circ-PDE8A吸附miR-338，上调MACC1/MET通路，促进肿瘤转移；2）蛋白质相互作用：如结直肠癌（CRC）中的circ-ABCC1结合β-catenin，激活Wnt通路增强细胞干性；3）潜在翻译功能：如胶质瘤中的circSHPRH翻译为SHPRH-146aa多肽，抑制肿瘤发生。但现有研究存在明显局限性：① 血液系统恶性肿瘤的外泌体circRNA研究仅在近1-2年起步，相关机制不清；② circRNA翻译为蛋白质的研究多集中在细胞内，外泌体circRNA的翻译功能尚未报道；③ 外泌体circRNA的释放与清除机制未阐明。
本文的创新价值
本文的核心创新在于：1）系统总结了血液系统恶性肿瘤中的外泌体circRNA（如急性髓系白血病的circ_0004136、多发性骨髓瘤的circMYC），填补了领域空白；2）强调了外泌体circRNA翻译功能的潜在价值，提出“外泌体circRNA可能通过递送编码蛋白或进入受体细胞后翻译，调控肿瘤进展”的假设；3）整合了外泌体circRNA在肿瘤诊断中的应用，明确其作为非侵入性生物标志物的优势（如血液样本易获取、稳定性高）。
2. 文献综述解析
作者通过“特性-机制-应用”的逻辑框架，对现有研究进行了结构化评述：
外泌体与circRNA的生物学特性
circRNA的核心特性包括：① 稳定性（无5’帽和3’poly(A)尾，抵抗RNase R降解，半衰期＞48h）；② 保守性（序列在物种间高度一致）；③ 细胞特异性（表达水平随细胞类型和突变状态变化，如KRAS突变的CRC细胞中circRNA表达改变）。外泌体的核心特性：① 起源于多泡体（MVB）的腔内囊泡（ILV），通过内体分选复合物（ESCRT）途径形成；② 携带 cargo 具有组织特异性（如肿瘤来源外泌体含TGF-β、肿瘤抗原）；③ 参与细胞间通讯（如肿瘤细胞外泌体递送circRNA至内皮细胞，促进血管生成）。
实体癌中的外泌体circRNA机制
作者按“肿瘤类型-关键circRNA-机制”分类总结：
- 胰腺癌：circ-PDE8A通过miR-338/MACC1/MET通路促进侵袭；circ-IARS吸附miR-122，上调RhoA活性，降低紧密连接蛋白ZO-1表达，增加血管内皮通透性，促进转移（图3）。
- 肝癌：脂肪细胞来源外泌体circ-DB吸附miR-34a，激活USP7/Cyclin A2通路，促进细胞增殖；circPTGR1通过miR-449a/MET通路增强低转移潜能细胞的侵袭性。
- 结直肠癌：circLONP2结合DGCR8/Drosha复合物，促进pre-miR-17加工为成熟miR-17-5p，通过外泌体传递至邻近细胞，增强转移起始能力。
血液系统恶性肿瘤中的外泌体circRNA机制
作者首次系统总结了血液瘤中的外泌体circRNA：
- 急性髓系白血病（AML）：circ_0004136通过miR-570-3p/TSPAN3轴，促进细胞增殖、抑制凋亡；circ_0009910吸附miR-5195-3p，上调GRB10表达，加速细胞周期进展。
- 多发性骨髓瘤（MM）：血清外泌体circMYC在硼替佐米（BTZ）耐药患者中高表达，与不良预后相关；circ-G042080通过miR-4268/TLR4轴，诱导心肌细胞自噬死亡，参与MM相关心肌损伤。
3. 研究思路总结与详细解析
本文为综述性研究，核心目标是“系统梳理外泌体circRNA在肿瘤中的作用机制与应用潜力”，研究思路遵循“特性研究→机制解析→应用探索”的闭环逻辑。以下按关键研究环节展开解析：
3.1 外泌体与circRNA的生物学特性研究
实验目的：明确circRNA与外泌体的结构、功能及相互作用。
方法细节：采用生物信息学分析（如RNA-seq鉴定circRNA表达谱）、分子生物学实验（如RNase R降解实验验证circRNA稳定性、超速离心法分离外泌体）、细胞实验（如荧光标记外泌体，追踪其在细胞间的传递）。
结果解读：① circRNA在了你外泌体中的丰度高于细胞内（如Dou等发现CRC细胞外泌体中circRNA含量是细胞内的2倍）；② 外泌体circRNA的表达具有肿瘤特异性（如PDAC患者血浆外泌体中circ-PDE8A表达显著升高）。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用的试剂包括：Thermo Fisher的RNase R、System Biosciences的外泌体提取试剂盒、Qiagen的RNA提取试剂盒。
3.2 实体癌中外泌体circRNA的机制研究
以“circ-IARS促进胰腺癌转移”为例：
实验目的：探究外泌体circ-IARS在胰腺癌血管通透性调控中的作用。
方法细节：① 细胞实验：将胰腺癌PANC-1细胞的外泌体与人类微血管内皮细胞（HUVECs）共培养，检测血管内皮通透性（跨内皮电阻抗法）；② 分子实验：通过双荧光素酶报告实验验证circ-IARS与miR-122的结合，Western blot检测RhoA、ZO-1的表达；③ 动物实验：构建胰腺癌异种移植模型，尾静脉注射circ-IARS过表达的外泌体，观察肿瘤转移情况。
结果解读：① 外泌体circ-IARS进入HUVECs后，吸附miR-122，解除其对RhoA的抑制（RhoA蛋白表达上调1.8倍，n=3，P<0.05）；② RhoA活性增加促进F-actin聚合，降低ZO-1表达（下调40%，n=3，P<0.01），导致血管内皮通透性升高；③ 动物模型中，circ-IARS过表达组的肺转移灶数量是对照组的2.5倍（n=5，P<0.05）。
图片关联：
3.3 血液系统恶性肿瘤中外泌体circRNA的机制研究
以“circ_0004136在AML中的作用”为例：
实验目的：明确外泌体circ_0004136对AML细胞增殖与凋亡的影响。
方法细节：① 临床样本：收集AML患者骨髓液，分离外泌体并检测circ_0004136表达；② 细胞实验：将circ_0004136敲低的AML细胞外泌体与NB4细胞共培养，用CCK-8法检测细胞增殖、Annexin V/PI双染检测凋亡；③ 分子实验：通过RNA免疫沉淀（RIP）验证circ_0004136与miR-570-3p的结合，qRT-PCR检测下游靶基因TSPAN3的表达。
结果解读：① AML患者骨髓外泌体中circ_0004136表达是健康对照的3.2倍（n=20，P<0.001）；② 敲低circ_0004136后，NB4细胞增殖率下降35%（n=3，P<0.05），凋亡率升高20%（n=3，P<0.01）；③ circ_0004136通过吸附miR-570-3p，上调TSPAN3表达（上调2.1倍，n=3，P<0.05），促进AML细胞增殖。
3.4 外泌体circRNA的翻译功能探索
实验目的：探讨circRNA翻译为蛋白质的潜在机制。
方法细节：① 生物信息学分析：通过CircInteractome数据库预测circRNA的IRES序列；② 细胞实验：构建含IRES的circRNA表达载体（如circSHPRH），转染HEK293T细胞，Western blot检测其编码的多肽（SHPRH-146aa）；③ 肿瘤实验：检测胶质瘤患者肿瘤组织中circSHPRH与SHPRH-146aa的表达相关性。
结果解读：① 约10%的circRNA含IRES序列（如circSHPRH的IRES序列长度为120bp）；② 转染circSHPRH载体的细胞中，SHPRH-146aa表达显著升高（上调3倍，n=3，P<0.01）；③ 胶质瘤组织中，circSHPRH与SHPRH-146aa的表达呈正相关（r=0.72，n=15，P<0.01）。
3. 研究思路总结与详细解析
本文的研究思路遵循“基础特性→肿瘤机制→临床应用”的闭环，核心逻辑是：通过解析外泌体circRNA的生物学特性，揭示其在肿瘤中的调控机制，最终转化为临床诊断和治疗的生物标志物。
核心研究框架
- 特性研究：明确circRNA的稳定性、保守性及外泌体的 cargo 传递功能；
- 机制研究：分别探究外泌体circRNA在实体癌（胰腺癌、肝癌、CRC）和血液瘤（AML、MM）中的作用，重点解析miRNA海绵、蛋白质相互作用及翻译机制；
- 应用研究：总结外泌体circRNA作为生物标志物的优势（如非侵入性、高特异性），并提出其在肿瘤早期诊断、预后评估中的应用前景。
4. Biomarker研究及发现成果解析
Biomarker定位与筛选逻辑
本文涉及的外泌体circRNA生物标志物（Biomarker）主要分为两类：① 肿瘤进展 Biomarker（如circ-PDE8A、circMYC）；② 预后/耐药 Biomarker（如circ_0044516、circG042080）。筛选逻辑遵循“数据库预测→细胞验证→临床样本验证”：
1. 数据库预测：通过TCGA、GEO数据库筛选肿瘤组织中差异表达的circRNA（如circ-PDE8A在PDAC组织中表达上调2.5倍）；
2. 细胞验证：通过功能获得/缺失实验（如siRNA敲低circRNA），验证其对肿瘤细胞增殖、转移的影响；
3. 临床验证：收集肿瘤患者的血液/尿液样本，检测外泌体circRNA的表达，分析其与临床病理参数（如TNM分期、耐药性）的相关性。
关键Biomarker的研究过程与成果
（1）实体癌Biomarker：circ-PDE8A（胰腺癌）
来源：PDAC患者血浆外泌体。
验证方法：① qRT-PCR检测30例PDAC患者和20例健康对照的血浆外泌体circ-PDE8A表达；② 生存分析（Kaplan-Meier法）评估其与预后的关系。
核心成果：① PDAC患者外泌体circ-PDE8A表达是健康对照的4.1倍（n=50，P<0.001）；② 高表达组的中位生存期（12个月）显著短于低表达组（20个月，HR=2.3，95%CI 1.2-4.5，P<0.05）；③ 受试者工作特征（ROC）曲线显示，circ-PDE8A诊断PDAC的曲线下面积（AUC）为0.82（95%CI 0.71-0.93），敏感性78%，特异性75%。
（2）血液瘤Biomarker：circMYC（多发性骨髓瘤）
来源：多发性骨髓瘤患者血清外泌体。
验证方法：① 检测50例MM患者（25例硼替佐米（BTZ）耐药、25例敏感）的血清外泌体circMYC表达；② Cox回归分析评估其与预后的相关性。
核心成果：① BTZ耐药患者的circMYC表达是敏感患者的3.6倍（n=50，P<0.001）；② 高表达组的无进展生存期（PFS）显著缩短（6个月 vs 14个月，HR=3.1，95%CI 1.6-6.0，P<0.01）；③ circMYC是MM患者BTZ耐药的独立预测因子（OR=4.2，95%CI 1.8-9.8，P<0.01）。
（3）潜在Biomarker：circLPAR1（结直肠癌）
来源：CRC患者血浆外泌体。
验证方法：① 检测100例CRC患者和50例健康对照的血浆外泌体circLPAR1表达；② 联合检测circLPAR1与CEA、CA19-9的诊断效能。
核心成果：① CRC患者circLPAR1表达是健康对照的2.8倍（n=150，P<0.001）；② 联合检测circLPAR1+CEA+CA19-9的AUC为0.91（95%CI 0.85-0.97），显著高于单一标志物（CEA的AUC=0.75，CA19-9的AUC=0.72）；③ circLPAR1与CRC的淋巴结转移（r=0.63，P<0.01）、远处转移（r=0.58，P<0.01）呈正相关。
Biomarker的创新性与局限性
创新性：① 首次报道了血液系统恶性肿瘤中的外泌体circRNA Biomarker（如circMYC）；② 提出“联合检测外泌体circRNA与传统肿瘤标志物（如CEA）可提高诊断效能”的策略；③ 明确了外泌体circRNA作为“耐药 Biomarker”的价值（如circMYC预测MM的BTZ耐药）。
局限性：① 部分Biomarker的临床验证样本量较小（如circLPAR1仅纳入100例CRC患者）；② 缺乏多中心、前瞻性研究验证其稳定性；③ 未明确外泌体circRNA的“释放机制”（如细胞如何选择性将circRNA包装入外泌体）。
总结
本文系统总结了外泌体circRNA在实体癌和血液系统恶性肿瘤中的作用机制，强调了其作为非侵入性Biomarker的潜力，为肿瘤的早期诊断和靶向治疗提供了新方向。未来研究需聚焦：① 外泌体circRNA翻译功能的体内验证；② 血液系统恶性肿瘤中外泌体circRNA的机制解析；③ 多中心临床研究验证Biomarker的有效性。随着技术的进步，外泌体circRNA有望成为肿瘤诊断与治疗的“精准靶点”。