1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：S100A8/A9 as a risk factor for breast cancer negatively regulated by DACH1；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：乳腺癌生物标志物与转录调控机制。
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，2020年全球新发病例达226万，死亡68万。随着分子分型（luminal A/B、Her2过表达、三阴性）的推广，靶向治疗（如抗Her2抗体、CDK4/6抑制剂）和免疫治疗显著改善了患者预后，但仍有部分患者因早期转移、耐药或缺乏精准预后标志物而死亡。因此，挖掘兼具预后预测与机制调控价值的生物标志物，是乳腺癌研究的核心方向之一。
S100A8和S100A9是钙结合EF-hand超家族成员，主要由中性粒细胞和巨噬细胞分泌，作为“警报素”参与先天免疫激活，通过结合 toll样受体4（TLR4）和晚期糖基化终产物受体（RAGE）触发炎症反应。近年来研究发现，S100A8/A9在多种癌症（如肺癌、胃癌、结肠癌）中高表达，但其功能存在争议：部分研究认为其通过激活AKT、NF-κB等通路促进肿瘤增殖转移，另一部分研究则发现其在头颈部鳞癌中低表达，与分化差、转移风险高相关。在乳腺癌中，S100A8/A9的报道多集中于促转移和耐药，但其预后价值（是否为独立预后因子）及转录调控机制尚未明确。
DACH1是视网膜决定基因网络（RDGN）成员，作为肿瘤抑制因子被广泛研究：其通过抑制 cyclin D1、CXCL8等基因的转录，抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和肿瘤生长。然而，DACH1与S100A8/A9的关系尚未见报道。针对上述研究空白，本文献聚焦于两个核心问题：（1）S100A8/A9在乳腺癌中的预后意义；（2）DACH1对S100A8/A9的调控作用及临床价值。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的评述逻辑围绕“S100A8/A9的功能谱”和“DACH1的抑癌机制”展开，具体分为三类：
（1）S100A8/A9的基础功能与疾病关联
S100A8/A9最初被发现于中性粒细胞，作为钙传感器调节细胞骨架重组、呼吸爆发等生理过程；随后研究证实其参与炎症（如类风湿关节炎）、代谢疾病（如肥胖、糖尿病）的病理过程，通过促进促炎细胞因子（如IL-6、TNF-α）分泌放大炎症反应。
（2）S100A8/A9在癌症中的“双面性”
现有研究显示，S100A8/A9在癌症中的作用存在异质性：在肺癌、胃癌中，其高表达与肿瘤增殖、转移相关；但在头颈部鳞癌中，其低表达与 poor differentiation、高转移风险相关。这种差异可能与肿瘤微环境（如免疫细胞浸润）或细胞类型（上皮细胞vs免疫细胞）有关，但乳腺癌中S100A8/A9的功能仍不明确。
（3）DACH1的抑癌机制
DACH1作为转录共抑制因子，通过与DNA结合蛋白（如SIX1、EYA）相互作用，抑制癌基因（如cyclin D1）和细胞因子（如CXCL5、CXCL8）的转录，从而抑制肿瘤生长。但其对S100A8/A9的调控作用及联合预后价值尚未被探索。
作者指出，现有研究的核心不足是：① S100A8/A9在乳腺癌中的预后意义未被系统验证（缺乏大样本组织芯片和血清数据）；② 其转录调控机制未知；③ 未探索与DACH1的联合预后价值。本研究的创新点在于：首次通过多维度数据（生物信息学、组织、血清、细胞、动物）验证S100A8/A9的预后价值，并揭示DACH1对其的负调控作用，为乳腺癌风险分层提供新的生物标志物组合。
3. 研究思路总结与详细解析
本研究采用“生物信息学筛选→临床样本验证→机制探索→体内验证”的闭环思路，涵盖8个关键实验环节：
3.1 生物信息学分析：S100A8/A9 mRNA的临床关联
实验目的：分析S100A8/A9 mRNA水平与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。
方法细节：① 从GEO数据库筛选29个乳腺癌数据集，进行meta分析（评估mRNA与分化、ER/PR/Her2状态的关联）；② 利用TCGA数据库分析mRNA在分子亚型（luminal、Her2+、三阴性）中的表达；③ 通过Kaplan-Meier plotter工具分析mRNA与总生存（OS）、无复发生存（RFS）、无远处转移生存（DMFS）的关系。
结果解读：① S100A8/A9 mRNA在乳腺癌中显著高于正常组织（P<0.0001）；② 与低分化（Grade3 vs Grade1，P<0.0001）、ER-（P<0.0001）、PR-（P<0.0001）、Her2+（P<0.0001）相关；③ 高mRNA水平预示更短的OS（HR=1.52，95%CI 1.31-1.76，P<0.0001）、RFS（HR=1.38，95%CI 1.23-1.55，P<0.0001）和DMFS（HR=1.45，95%CI 1.26-1.67，P<0.0001）。
产品关联：使用UCSC Xena、Kaplan-Meier plotter等在线工具，未提及具体实验产品。
3.2 组织芯片与免疫组化：S100A8/A9蛋白的临床验证
实验目的：验证S100A8/A9和DACH1的蛋白表达与临床病理特征及生存的关联。
方法细节：① 采用两个组织芯片（BR2082a：包含120例原发乳腺癌、32例转移癌、16例正常组织；HBre145Su01：145例带10年随访的乳腺癌组织）；② 免疫组化（IHC）检测S100A8（Proteintech，15792-1-AP，1:300）、S100A9（Proteintech，26992-1-AP，1:300）、DACH1（Proteintech，10914-1-AP，1:200）的表达；③ 采用Fromowitz评分（染色强度×阳性细胞比例）评估蛋白水平，分析与分化、ER/PR/Her2状态、分子亚型及生存的关系。
结果解读：① S100A8/A9蛋白在乳腺癌中显著高于正常组织（P<0.0001）、炎症组织（P=0.0006）和增生组织（P=0.0130）；② 与低分化（Grade3 vs Grade1，P<0.0001）、ER-（P<0.0001）、PR-（P<0.0001）、Her2+（P=0.0003）、基底样/Her2过表达亚型（P<0.0001）相关；③ 高表达者OS更短（HR=3.425，95%CI 1.317-8.907，P=0.012），是独立预后因子；④ DACH1与S100A8/A9蛋白表达负相关（P<0.0001）。
产品关联：实验所用关键产品：Proteintech的S100A8抗体（15792-1-AP）、S100A9抗体（26992-1-AP）、DACH1抗体（10914-1-AP）。
3.3 血清ELISA检测：S100A8的循环水平验证
实验目的：分析血清S100A8浓度与临床病理特征的关联。
方法细节：收集85例乳腺癌患者（65例）和良性乳腺结节患者（20例）的血清，采用R&D系统的Human S100A8 DuoSet ELISA kit（DY4570-05）检测S100A8浓度。
结果解读：① 乳腺癌患者血清S100A8浓度显著高于良性结节患者（P=0.002）；② 与低分化（Grade3 vs Grade1-2，P=0.0009）、ER-（P<0.0001）、PR-（P<0.0001）、Her2+（P<0.0001）、基底样/Her2过表达亚型（P<0.0001）相关。
产品关联：实验所用关键产品：R&D系统的Human S100A8 ELISA试剂盒（DY4570-05）。
3.4 细胞实验：DACH1对S100A8/A9的调控
实验目的：验证DACH1对S100A8/A9的抑制作用。
方法细节：① 选择内源性DACH1低表达的乳腺癌细胞系（CAMA-1、MDA-MB-231），通过慢病毒转染构建DACH1过表达稳转株（对照组为空载向量）；② Western blot（Transgen总蛋白提取试剂盒，DE101-01；CST GAPDH抗体，5174，1:1000）验证DACH1表达；③ ELISA检测细胞上清液中S100A8的浓度。
结果解读：① 过表达DACH1后，CAMA-1和MDA-MB-231细胞的S100A8分泌量显著降低（P均<0.05）；② Western blot证实DACH1蛋白水平升高（与空载组相比，灰度值增加2.5倍，P<0.01）。
产品关联：实验所用关键产品：Transgen的总蛋白提取试剂盒（DE101-01）、CST的GAPDH抗体（5174）、CST的抗兔二抗（7074，1:2000）。
3.5 荧光素酶报告基因 assay：DACH1的调控机制
实验目的：探索DACH1调控S100A8/A9的分子结构域。
方法细节：① 构建S100A8/A9启动子的荧光素酶质粒（插入pGL3-basic载体）；② 构建DACH1野生型（WT）、DS结构域缺失型（ΔDS）、C端截短型（C-ter）的表达质粒；③ 将启动子质粒与DACH1质粒共转染293T细胞，36小时后用Vazyme的Bio-Lite™ Luciferase Assay System（DD1201）检测荧光素酶活性。
结果解读：① 野生型DACH1显著抑制S100A8/A9启动子活性（与空载组相比，活性降低60%，P<0.0001）；② ΔDS突变体（缺失DS结构域）的抑制作用完全消失，C-ter突变体的抑制作用减弱（活性降低30%，P<0.05）。提示DACH1通过DS结构域抑制S100A8/A9的转录。
产品关联：实验所用关键产品：Vazyme的荧光素酶检测试剂盒（DD1201）。
3.6 裸鼠异种移植实验：体内验证DACH1的作用
实验目的：验证DACH1对肿瘤生长及S100A8/A9表达的影响。
方法细节：① 将MDA-MB-231-DACH1稳转株（过表达DACH1）和MDA-MB-231-vector（空载）接种于BALB/c裸鼠右侧乳腺脂肪垫（3×10^6细胞/只，每组5只）；② 每5天测量肿瘤大小（体积=0.5×长×宽²），35天后处死小鼠，称量肿瘤重量；③ 免疫组化检测肿瘤组织中S100A8/A9、Ki67（增殖标志物）、PCNA（增殖标志物）、cleaved-caspase 3（凋亡标志物）的表达。
结果解读：① DACH1过表达组的肿瘤体积（0.32 cm³ vs 0.85 cm³，P<0.01）和重量（0.28 g vs 0.71 g，P<0.01）显著小于对照组；② S100A8/A9蛋白水平显著降低（IHC评分：2.1 vs 5.3，P<0.0001）；③ Ki67（15% vs 45%，P<0.0001）、PCNA（20% vs 50%，P<0.0001）表达降低，cleaved-caspase 3（30% vs 10%，P<0.01）表达升高。
产品关联：文献未提及具体实验产品，领域常规使用慢病毒包装试剂盒（如Invitrogen）、裸鼠（如北京维通利华）。
4. Biomarker研究及发现成果解析
（1）Biomarker定位与筛选逻辑
本研究中，S100A8/A9是兼具“组织学”与“血清学”的双重生物标志物，其筛选与验证遵循“多维度层层递进”的逻辑：
1. 生物信息学筛选：通过GEO、TCGA数据库发现S100A8/A9 mRNA与乳腺癌不良病理特征相关；
2. 组织学验证：利用大样本组织芯片证实S100A8/A9蛋白是独立预后因子；
3. 血清学验证：通过ELISA检测证实循环S100A8与临床病理特征的一致性；
4. 机制验证：细胞与动物实验证实DACH1的负调控作用；
5. 联合价值：结合DACH1表达提高预后预测准确性。
（2）研究过程详述
- 来源：组织 biomarker 来自乳腺癌手术标本（组织芯片），血清 biomarker 来自患者外周血。
- 验证方法：① 组织水平：免疫组化（定性+半定量）；② 血清水平：ELISA（定量）；③ 机制水平：细胞稳转株、荧光素酶报告基因、动物实验。
- 特异性与敏感性：① 组织S100A8/A9区分乳腺癌与正常组织的ROC曲线AUC=0.89（95%CI 0.85-0.93，敏感性85%，特异性82%）；② 血清S100A8区分乳腺癌与良性结节的AUC=0.81（95%CI 0.73-0.89，敏感性78%，特异性75%）。
- 临床关联：① 组织S100A8/A9高表达与低分化（OR=3.2，95%CI 1.8-5.7，P<0.0001）、ER-（OR=4.1，95%CI 2.3-7.4，P<0.0001）、Her2+（OR=2.8，95%CI 1.5-5.2，P=0.0003）相关；② 血清S100A8高浓度与基底样亚型（OR=5.6，95%CI 2.7-11.6，P<0.0001）、Her2过表达亚型（OR=4.3，95%CI 2.1-8.8，P<0.0001）相关。
（3）核心成果提炼
- S100A8/A9是乳腺癌独立预后 biomarker：无论是组织还是血清水平，其高表达均与不良临床病理特征（低分化、ER-、Her2+）和短OS相关，且是独立预后因子（HR=3.425，P=0.012）。
- DACH1负调控S100A8/A9的转录：DACH1通过DS结构域抑制S100A8/A9启动子活性，进而减少其分泌；细胞与动物实验证实这一调控关系。
- 联合检测提高预后准确性：高S100A8/A9+低DACH1的患者OS最短（中位OS=36个月 vs 72个月，P=0.002），联合检测的预后预测价值优于单一 biomarker。
总结
本研究通过多维度数据（生物信息学、临床样本、细胞、动物）系统验证了S100A8/A9作为乳腺癌不良预后 biomarker的价值，并首次揭示DACH1对其的负调控作用。其创新点在于：（1）明确S100A8/A9是乳腺癌独立预后因子；（2）建立“DACH1-S100A8/A9”调控轴；（3）提出“高S100A8/A9+低DACH1”的联合 biomarker，为乳腺癌风险分层提供新依据。未来研究可进一步探索S100A8/A9作为治疗靶点的可能性（如中和抗体），或结合液体活检（血清S100A8）用于早期筛查。