1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Current advances and future perspectives on the functional roles and clinical implications of circular RNAs in esophageal squamous cell carcinoma: more influential than expected；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：食管鳞状细胞癌（ESCC）中的环状RNA（circRNA）研究。
食管鳞状细胞癌（ESCC）是全球发病率第七、死亡率第六的胃肠道恶性肿瘤，2020年全球新增60.4万例、死亡54.4万例。其预后差的核心原因是早期无特异性症状，约70%患者确诊时已达晚期或出现远处转移，且放化疗耐药率高，5年生存率不足20%。因此，探索ESCC的分子机制、寻找敏感特异的生物标志物及治疗靶点是领域亟待解决的问题。
环状RNA（circRNA）是一类具有共价闭合环状结构的非编码RNA，无5’帽和3’尾，比线性RNA更稳定（不易被RNA外切酶降解），且具有组织特异性和细胞定位特异性。早期研究认为circRNA是pre-mRNA剪接的“副产物”，无功能；但随着高通量测序和生物信息学技术的发展，发现circRNA可通过miRNA海绵（ceRNA机制）、调控转录、翻译功能蛋白、结合RNA结合蛋白（RBP）等多种方式调控基因表达，参与肿瘤增殖、转移、耐药等过程。近年来，越来越多研究表明circRNA在ESCC中差异表达，有望成为ESCC的诊断、预后生物标志物及治疗靶点。但目前研究仍存在不足：①机制研究多集中在miRNA海绵，结合蛋白和翻译功能的探索较少；②临床验证样本量小，缺乏多中心数据；③治疗策略的安全性和靶向性需优化。
本综述系统总结了circRNA在ESCC中的生物发生、功能机制、临床应用及未来方向，旨在为ESCC的精准诊疗提供理论依据。
2. 文献综述解析
核心评述逻辑
作者以“circRNA基础研究→ESCC应用研究→临床转化”为脉络，按“生物发生→功能→ESCC中的差异表达→调控机制（增殖、转移、耐药、细胞死亡）→临床应用（诊断、预后、治疗）→挑战与展望”组织内容，全面覆盖circRNA在ESCC中的研究全景。
现有研究总结
- circRNA的生物发生与功能：circRNA由pre-mRNA通过套索驱动、内含子配对、RBP驱动、内含子环化等方式生成（图1），转录速率、内含子互补序列（如ALU重复）、RBP（如MBL、QKI）等因素影响其表达。其功能包括：①miRNA海绵（如ciRS-7结合73个miR-7位点）；②调控转录（如circEIF3J通过U1 snRNP增强宿主基因转录）；③翻译蛋白（如circ-ZNF609通过IRES启动翻译）；④结合RBP（如circACTN4结合FUBP1调控MYC表达）。
- ESCC中的差异circRNA：通过circRNA芯片（高效但仅检测已知circRNA）或RNA-seq（发现新circRNA但有效读段<0.1%），研究发现ESCC组织/血浆中存在大量差异circRNA（如Song等用6对组织筛选出2046个差异circRNA，其中1148个上调、898个下调）。
- 调控ESCC进展的机制：circRNA通过多种通路调控ESCC增殖（如circOGDH通过miR-615-5p/PDX1促进细胞周期）、转移（如circLPAR3通过miR-198/c-MET激活PI3K/AKT通路）、耐药（如circVRK1通过miR-624-3p/PTEN增强放疗敏感性）、细胞死亡（如circPVT1通过miR-30a-5p/FZD3抑制铁死亡）。
- 临床应用潜力：circRNA作为非侵入性生物标志物（如血浆circ-SLC7A5 AUC=0.77）或组织标志物（如circ-SMAD7 AUC=0.86）具有诊断价值；部分circRNA与临床特征（如淋巴结转移、OS）相关（如hsa_circ_0026611预测淋巴结转移）；治疗方面，ASO、CRISPR/Cas13等技术可靶向circRNA（如circPDE3B knockdown减少肿瘤生长）。
综述创新点
- 机制覆盖全面：首次系统总结了circRNA在ESCC中的细胞死亡机制（铁死亡、焦亡）和耐药机制，填补了此前研究空白；
- 临床视角明确：重点讨论了circRNA作为联合诊断标志物的优势（如hsa_circ_0001946+hsa_circ_0062459 AUC=0.928），并提出治疗策略的优化方向（如CRISPR/Cas13的安全性评估）；
- 未来方向清晰：指出需深入探索circRNA的翻译功能、开发新型检测技术（如单分子测序）、开展大样本多中心临床验证。
3. 研究思路总结与详细解析
本综述的研究思路围绕“基础→应用→转化”展开，具体环节如下：
3.1 circRNA的生物发生与功能概述
作者首先介绍circRNA的生成方式（图1），包括：①套索驱动环化（pre-mRNA形成套索结构，剪接为EcRNA/EIciRNA）；②内含子配对环化（内含子互补序列结合驱动环化）；③RBP驱动环化（如MBL结合内含子序列促进circMbl生成）；④内含子环化（剪接后的内含子形成ciRNA）；⑤tricRNAs（pre-tRNA经TSEN酶切形成）。随后阐述circRNA的四大功能（图2）：miRNA海绵、调控转录、翻译蛋白、结合RBP。
图1 circRNA的生物发生机制：A.套索驱动环化；B.内含子配对环化；C.RBP驱动环化；D.内含子环化；E.tricRNAs形成。
图2 circRNA的功能：A.核内调控转录；B.胞质miRNA海绵；C.结合RBP；D.翻译蛋白。
3.2 ESCC中差异circRNA的筛选
作者总结了多项高通量研究：①Song等用6对ESCC组织芯片筛选出2046个差异circRNA（1148个上调、898个下调）；②Sun等用RNA-seq发现1055个差异circRNA（418个上调、637个下调）；③Jiang等用RNA-seq发现3288个差异circRNA（2139个上调、1149个下调）。作者指出，circRNA芯片比RNA-seq更高效，但仅能检测已知circRNA；RNA-seq可发现新circRNA，但有效读段少。
3.3 circRNA调控ESCC增殖的机制
作者列举了多个关键circRNA：①circOGDH（高表达）：通过miR-615-5p上调PDX1，促进细胞周期进展；②circNELL2（高表达）：通过miR-127-5p上调CDC6（DNA复制关键因子），促进增殖；③circ-ITCH（低表达）：通过海绵miR-7/17/214上调ITCH，抑制Wnt/β-catenin通路，减少c-Myc表达；④circLAPR4（低表达）：通过miR-1323上调PTEN，抑制PI3K/AKT通路。
3.4 circRNA调控ESCC转移的机制
circRNA主要通过EMT通路促进转移：①circLPAR3（高表达）：通过miR-198上调c-MET，激活PI3K/AKT和RAS/MAPK通路；②circVRK1（低表达）：通过miR-624-3p上调PTEN，抑制PI3K/AKT通路；③circ-NRIP1（高表达）：通过miR-595上调SEMA4D，激活PI3K/AKT通路；④circ-DOCK5（低表达）：通过海绵miR-627-3p上调TGFB2，抑制TGF-β/SMAD/ZEB1轴。此外，血清外泌体hsa_circ_0026611高表达与淋巴结转移相关，可作为转移预测标志物。
图3 circRNA在ESCC中的功能总结：参与增殖、转移、耐药、细胞死亡。
3.5 circRNA调控ESCC细胞死亡与耐药的机制
- 细胞死亡：①circ0120816（高表达）：通过miR-1305上调TXNRD1，抑制凋亡（减少Cleaved PARP、Bax表达）；②ciRS-7（高表达）：通过miR-1299上调EGFR，抑制自噬；③circPVT1（高表达）：通过miR-30a-5p上调FZD3，抑制铁死亡（增加GPX4/SLC7A11表达）；④circPUM1（高表达）：抑制焦亡，促进肿瘤生长。
- 耐药：①circVRK1：过表达增强放疗敏感性；②circ100367：激活Wnt3通路增强放疗抵抗；③circPSMC3：通过miR-10a-5p上调PTEN，增强吉非替尼敏感性；④circ_0006168：通过miR-194-5p上调JMJD1C，增强紫杉醇耐药。
3.6 circRNA的临床应用研究
作者讨论了circRNA作为诊断、预后、治疗靶点的潜力：
- 诊断：循环circRNA（如circ-SLC7A5 AUC=0.77、circ0004771 AUC=0.82）为非侵入性标志物，联合检测（hsa_circ_0001946+hsa_circ_0062459）AUC=0.928，敏感性84%、特异性98%；
- 预后：hsa_circ_0026611与OS相关，circGSK3β与CEA联合AUC=0.80，预测预后更准确；
- 治疗：①ASO/siRNA：靶向circRNA的反向剪接位点（如circPDE3B knockdown减少肿瘤生长）；②CRISPR/Cas13：删除circRNA编码基因或ALU元件（更高效但需评估安全性）；③合成miRNA海绵：如同时抑制miR-21和miR-93的circRNA（图4）。
图4 circRNA的治疗策略：knockdown（ASO/siRNA/CRISPR）、过表达、合成miRNA海绵。
4. Biomarker研究及发现成果解析
Biomarker定位与筛选逻辑
本综述中的Biomarker为ESCC患者血清/血浆或组织中的circRNA，筛选验证逻辑为“高通量筛选→细胞功能验证→临床相关性分析”：①通过芯片/RNA-seq筛选差异circRNA；②qRT-PCR验证表达；③细胞实验（增殖、转移）验证功能；④临床样本分析（与TNM分期、OS的关系）评估价值。
研究过程与成果
- 循环circRNA（非侵入性）
- hsa_circ_0026611：血清外泌体中高表达，与T分期、N分期、术后放化疗相关，能预测淋巴结转移（未明确敏感性/特异性）；
- circ-SLC7A5：血浆中高表达，AUC=0.77（诊断ESCC）；
- circ0004771：血浆中高表达，AUC=0.82（诊断ESCC）；
hsa_circ_0001946 + hsa_circ_0062459：联合检测血浆中的两个circRNA，AUC=0.928，敏感性84%、特异性98%，诊断效率优于单个标志物。
组织circRNA（侵入性）
- circ-SMAD7：组织/血浆中低表达，AUC=0.86（诊断ESCC）；
- circGSK3β：组织中高表达，与CEA联合AUC=0.80（预测预后）；
- hsa_circ_0006948：组织中高表达，与OS和淋巴结转移相关（预测转移）。
核心成果
- 诊断价值：循环circRNA作为非侵入性标志物，具有较高的AUC值（如联合检测AUC=0.928），解决了ESCC早期诊断的痛点；
- 预后价值：部分circRNA与临床特征强相关（如hsa_circ_0026611预测淋巴结转移），可用于风险分层；
- 创新性：首次提出联合circRNA检测策略，显著提高诊断效率；发现circRNA与铁死亡、焦亡的关联，为预后评估提供新靶点。
局限性
- 多数Biomarker的95% CI、样本量未明确（如circ-SLC7A5的样本量未提及）；
- 缺乏纵向研究（如跟踪患者治疗后的circRNA变化）；
- 检测方法未标准化（如外泌体分离、qRT-PCR引物设计）。
结论与展望
本综述系统总结了circRNA在ESCC中的研究进展，明确了其作为生物标志物和治疗靶点的潜力。未来研究需聚焦：①深入探索circRNA的翻译功能（如是否通过m6A修饰翻译蛋白）；②开发单分子测序等新型检测技术，提高circRNA的检测灵敏度；③开展大样本多中心临床研究，验证Biomarker的有效性；④优化治疗策略（如靶向递送系统），提高CRISPR/Cas13的安全性。
随着研究的深入，circRNA有望成为ESCC精准诊疗的“新利器”。