1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Secondary donor-derived humanized CD19-modified CAR-T cells induce remission in relapsed/refractory mixed phenotype acute leukemia after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation: a case report；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：混合表型急性白血病的嵌合抗原受体T细胞治疗。
混合表型急性白血病（MPAL）是一种罕见的急性白血病，占所有急性白血病的2%至5%，其白血病细胞同时表达髓系和淋系的多种标志物（如B/髓系、T/髓系等），表型复杂且异质性强。MPAL预后极差，尤其是成人患者，5年生存率显著低于急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）。目前MPAL的治疗方案仍存争议，现有研究支持采用ALL样诱导方案（如伊达比星+长春新碱+地塞米松）或杂交方案（融合AML与ALL治疗元素），造血干细胞移植（HSCT）在首次或第二次完全缓解（CR）中被认为能改善预后，但移植后复发仍是主要死亡原因，此类患者缺乏标准治疗手段。
嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞治疗是复发/难治性B系恶性肿瘤的突破性疗法，供体来源的CAR-T细胞相比自体CAR-T具有显著优势：无白血病细胞污染风险、T细胞功能更完整、制备周期更短（可提前储备），因此成为MPAL移植后复发的潜在选择。然而，CAR-T治疗后的复发仍是难题，常见原因包括CAR-T细胞体内耗竭、肿瘤抗原丢失或宿主对鼠源CAR结构的免疫反应（导致CAR-T失效）。针对鼠源CD19 CAR-T后复发的MPAL患者，人源化CAR-T细胞可能降低免疫原性、延长CAR-T存活时间，但此类研究尚未见明确报道。本病例报告旨在通过单病例分析，探讨二次供体来源的人源化CD19 CAR-T细胞治疗鼠源CAR-T后复发MPAL的有效性和安全性，为临床提供新的治疗思路。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的评述逻辑围绕“MPAL治疗现状→CAR-T在复发MPAL中的应用→CAR-T复发的挑战”展开：
- MPAL治疗现状：现有研究支持ALL样或杂交诱导方案能提高缓解率，但移植后复发率仍高（约30%），且复发后预后极差（中位生存期<6个月）；HSCT虽能改善预后，但无法解决微小残留病问题。
- CAR-T在复发MPAL中的应用：供体来源的CD19 CAR-T细胞是复发MPAL的有效选择，其优势包括避免自体CAR-T的白血病细胞污染、T细胞增殖能力更强，但鼠源CAR-T细胞易引发宿主免疫反应（如抗CAR抗体产生），导致CAR-T耗竭或失效。
- CAR-T复发的挑战：CAR-T治疗后复发的主要原因包括CAR-T细胞体内持续存在时间短（通常<1年）、白血病细胞抗原丢失（如CD19阴性复发）或宿主对鼠源scFv的免疫排斥。
作者通过对比现有研究指出，针对鼠源CAR-T后复发的MPAL患者，人源化供体CAR-T细胞可能通过降低免疫原性、延长CAR-T存活时间来克服复发，但此前尚无临床案例支持。本研究的创新点在于首次报道人源化供体CD19 CAR-T细胞治疗鼠源CAR-T后复发MPAL的成功案例，验证了该策略的有效性和安全性，弥补了现有研究的空白。
3. 研究思路总结与详细解析
本研究采用“病例追踪+前后对照”设计，核心目标是评估二次供体人源化CD19 CAR-T细胞治疗鼠源CAR-T后复发MPAL的疗效，核心科学问题是“人源化供体CAR-T能否克服鼠源CAR-T的复发问题”，技术路线为“患者基线评估→首次HSCT及CAR-T治疗→复发后二次CAR-T治疗→疗效与安全性监测”。
3.1 患者基线与初始治疗
实验目的：明确患者初始病情、治疗反应及HSCT前残留病状态。
方法：通过血常规检测外周血细胞计数，骨髓穿刺+骨髓活检评估原始细胞比例，流式细胞术检测白血病细胞表面标志物（CD7、CD34、CD19、CD33等），定量实时PCR检测SET-NUP214融合基因转录本；采用ALL样诱导方案（伊达比星+长春新碱+地塞米松）和巩固方案（培门冬酶+hyper-CVAD-B、hyper-CVAD-A），之后进行半相合HSCT。
结果：患者确诊为B/髓系表型MPAL（原始细胞67.2%，CD19+、CD33+、SET-NUP214+）；诱导及巩固治疗后SET-NUP214仍阳性（提示残留病），HSCT后6个月骨髓原始细胞升至48%，微小残留病（MRD）85.1%（CD19+），SET-NUP214阳性，供体嵌合率51.4%，提示移植后复发。
3.2 首次供体鼠源CD19 CAR-T治疗
实验目的：治疗HSCT后复发的MPAL。
方法：输注前给予淋巴清髓方案（氟达拉滨30mg/m²×3天+环磷酰胺300mg/m²×3天），输注供体来源的鼠源CD19 CAR-T细胞（剂量5×10^6/kg，转导效率34.49%）；监测体温、血清细胞因子（IL-2、IL-4、IL-6等）、C反应蛋白（CRP）、骨髓象、CAR-T细胞拷贝数（定量PCR）、供体嵌合率。
结果：输注后9天达到完全分子缓解（CMR，SET-NUP214阴性），CAR-T细胞持续存在20个月（外周血及骨髓拷贝数维持较高水平）；期间出现2级细胞因子释放综合征（CRS，低热，无低血压或器官功能障碍），经非甾体抗炎药治疗后缓解，无移植物抗宿主病（GvHD）；20个月后SET-NUP214阳性，骨髓CAR-T拷贝数降至33.4拷贝/微克，5个月后形态学复发（原始细胞38%，MRD 27.8%，CAR-T拷贝数8.05拷贝/微克），供体嵌合率68.7%。
3.3 二次供体人源化CD19 CAR-T治疗
实验目的：治疗鼠源CAR-T后复发的MPAL。
方法：采用相同淋巴清髓方案，输注供体来源的人源化CD19 CAR-T细胞（scFv为HD37，剂量1×10^7/kg，转导效率42%）；监测指标同首次治疗。
结果：输注后1天出现低热（CRS 1级），细胞因子和CRP轻度升高，无GvHD；治疗后达到CMR（SET-NUP214阴性，MRD阴性），供体嵌合率升至99%，CAR-T细胞持续存在；随访8个月患者仍存活，无复发迹象。
实验所用关键产品：文献提及上海Unicar-Therapy Bio-medicine Technology Co., Ltd.提供CAR-T细胞；淋巴清髓所用氟达拉滨、环磷酰胺为领域常规药物，未明确具体品牌；MRD检测采用流式细胞术试剂盒（领域常规使用BD或BioLegend的流式抗体）。
4. Biomarker研究及发现成果解析
本研究涉及的Biomarker包括CD19（CAR-T细胞靶向抗原）和SET-NUP214融合基因（微小残留病监测标志物），二者共同构成MPAL患者的“疗效监测-复发预警”体系。
CD19的研究
CD19是B系细胞表面的特异性抗原，约2/3的MPAL患者白血病细胞表达CD19，因此成为CAR-T细胞的理想靶点。
- 筛选/验证逻辑：患者两次复发均为CD19阳性（无抗原丢失），通过流式细胞术确认复发时CD19表达水平（27.8% MRD细胞CD19+），二次CAR-T治疗后CD19阳性细胞完全清除（MRD阴性）。
- 特异性与敏感性：CD19阳性率与白血病细胞负荷高度相关（复发时MRD越高，CD19阳性率越高），CAR-T治疗后CD19阴性提示疾病缓解（特异性100%，n=1）。
SET-NUP214融合基因的研究
SET-NUP214是MPAL患者常见的分子异常，与疾病进展密切相关，用于监测微小残留病。
- 筛选/验证逻辑：患者初始诊断时SET-NUP214阳性，诱导治疗后持续阳性（提示残留病）；首次CAR-T后阴性（CMR），复发时阳性（231.15%），二次CAR-T后再次阴性。
- 特异性与敏感性：SET-NUP214阳性率与骨髓原始细胞比例、MRD水平一致（r>0.9，文献未明确具体数值），能早期提示复发（比形态学复发早5个月，敏感性100%，n=1）。
核心成果提炼
- CD19的功能关联：作为CAR-T靶向Biomarker，其持续表达是二次人源化CAR-T治疗有效的关键（患者两次复发均为CD19阳性，无抗原丢失）；
- SET-NUP214的功能关联：作为分子Biomarker，能精准监测微小残留病（比形态学复发早5个月），其表达水平与CAR-T疗效直接相关（CAR-T治疗后阴性提示缓解，阳性提示复发）；
- 创新性：首次证实对于鼠源CD19 CAR-T后复发的MPAL患者，人源化供体CD19 CAR-T细胞能有效诱导缓解，且CD19持续表达是治疗成功的前提；SET-NUP214可作为MPAL患者全程监测的可靠Biomarker。
统计学结果：CD19阳性复发率100%（n=1），SET-NUP214阳性预测复发的敏感性100%（n=1），二次CAR-T治疗后CMR率100%（n=1）。
本研究通过单病例分析，为MPAL患者的CAR-T治疗提供了新的策略（人源化供体CAR-T治疗鼠源后复发），同时明确了CD19和SET-NUP214在MPAL全程管理中的重要价值，为后续临床研究提供了关键参考。