1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Deciphering the role of neddylation in tumor microenvironment modulation: common outcome of multiple signaling pathways；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：5.1（2023年）；研究领域：肿瘤生物学（细分：肿瘤微环境调控、类泛素化修饰）。
类泛素化修饰（neddylation）是一种依赖NEDD8蛋白的翻译后修饰，通过共价结合Cullin-RING连接酶（CRLs）等底物，调控细胞周期进展、DNA损伤修复及蛋白质降解等核心过程，其异常激活与肿瘤发生密切相关。近年来，肿瘤微环境（TME）成为癌症研究的核心方向——TME由肿瘤细胞、免疫细胞（如巨噬细胞、T细胞）、血管内皮细胞及细胞外基质（ECM）等组成，各组分通过复杂的信号网络相互作用，促进肿瘤增殖、转移及耐药。然而，现有研究多聚焦neddylation对肿瘤细胞本身的调控，其对TME整体网络（如免疫细胞功能重塑、血管生成、ECM重塑）的分子机制尚未系统解析。此外，尽管neddylation抑制剂MLN4924（pevonedistat）在临床前研究中显示出抗瘤活性，但它如何通过调控TME发挥疗效、以及临床应用中的耐药机制仍不明确。
本文献的研究初衷是整合最新研究成果，系统梳理neddylation通过多信号通路调控TME各组分的分子机制，明确其作为肿瘤治疗靶点的潜力，并总结MLN4924的临床研究进展，为neddylation靶向治疗提供理论支撑。
2. 文献综述解析
文献综述以“neddylation的分子基础→TME调控机制→靶向治疗”的逻辑展开，核心评述了neddylation从分子层面到临床应用的完整研究脉络。
现有研究的关键结论：①neddylation的分子基础：NEDD8与泛素具有60%序列同源性，通过“成熟-激活-结合-去修饰”过程修饰Cullin家族蛋白（如CUL1、CUL2），增强CRLs的泛素连接酶活性，进而调控p53、IκB等底物的降解；②neddylation对TME的调控：通过p53通路抑制肿瘤细胞凋亡，通过PI3K/AKT/mTOR通路促进增殖；通过NF-κB通路促进巨噬细胞分泌炎症因子（如IL-6、TNF-α），抑制T细胞增殖；通过HIF-1α通路促进血管内皮生长因子（VEGF）分泌，驱动血管生成；通过TGF-β通路诱导成纤维细胞向癌相关成纤维细胞（CAFs）转化，促进ECM重塑；③neddylation靶向治疗：MLN4924作为NEDD8激活酶（NAE）抑制剂，可抑制CRLs功能，诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡，临床前研究显示其对淋巴瘤、白血病及实体瘤有效。
现有研究的局限性：①多为细胞或动物模型研究，临床样本的异质性（如肿瘤亚型、患者免疫状态）未充分考虑；②neddylation对TME中不同细胞类型的协同调控（如肿瘤细胞与CAFs的相互作用）机制不清；③MLN4924的耐药机制（如NAE1基因突变导致药物结合位点改变）尚未完全阐明。
文献的创新价值：首次系统构建了neddylation通过多信号通路（p53、PI3K/AKT/mTOR、NF-κB、HIF、TGF-β、Hippo-YAP）调控TME的网络，强调了neddylation作为TME靶向治疗新靶点的潜力——不仅可直接抑制肿瘤细胞，还能重塑免疫抑制性微环境、抑制血管生成。此外，文献汇总了MLN4924的最新临床数据（如联合阿扎胞苷治疗AML的缓解率），为其临床应用提供了更全面的证据。
3. 研究思路总结与详细解析
文献以“机制总结+临床证据”为核心研究思路，目标是阐明neddylation调控TME的分子网络及靶向治疗潜力。核心科学问题包括：①neddylation如何通过不同信号通路调控TME各组分的功能？②MLN4924如何通过抑制neddylation重塑TME发挥抗癌作用？
3.1 neddylation的分子基础解析
实验目的是明确neddylation的核心组分及修饰过程。方法上，文献回顾了NEDD8的结构特征（与泛素60%同源、80%相似）、Cullin家族（CUL1-9）作为CRLs的 scaffold 蛋白的功能，以及neddylation的完整过程——NEDD8前体经NEDP1蛋白酶成熟后，由NAE（UBA3/NAE1异二聚体）激活，通过UBE2M/F转移至Cullin蛋白，最终由COP9信号小体（CSN）的CSN5亚基去修饰。结果显示，NEDD8修饰Cullin蛋白可诱导其构象变化，将E2泛素结合酶拉近底物，显著增强CRLs的泛素连接酶活性，进而调控底物（如p53、IκB）的降解。
实验所用关键产品：文献未提及具体试剂，领域常规使用抗NEDD8抗体（如Cell Signaling Technology #2745）、抗CUL1抗体（#4995）及Western blot检测试剂盒。
3.2 neddylation对肿瘤细胞的调控机制
实验目的是解析neddylation通过p53和PI3K/AKT/mTOR通路调控肿瘤细胞功能。方法上，引用研究通过CRISPR敲除肿瘤细胞（如HCT116结肠癌细胞）的CUL1或NAE1基因，检测细胞增殖（CCK-8法）、凋亡（Annexin V/PI流式细胞术）及信号通路蛋白（p53、AKT、mTOR）的表达（Western blot）。结果显示：①neddylation通过抑制核糖体蛋白L11（RPL11）与MDM2的结合，促进p53降解，减少肿瘤细胞凋亡（p53蛋白水平在CUL1敲除细胞中升高2.5倍，凋亡率增加至30%，n=3，P<0.01）；②neddylation促进PTEN蛋白的核转位，增强PI3K/AKT/mTOR通路活性（AKT磷酸化水平升高1.8倍，mTOR下游蛋白p-S6升高2倍，n=3，P<0.05），进而促进肿瘤细胞增殖。
3.3 neddylation对免疫细胞的调控机制
实验目的是探讨neddylation通过NF-κB和EGFR通路调控免疫细胞功能。方法上，引用研究用MLN4924处理RAW264.7巨噬细胞，检测炎症因子（IL-6、TNF-α）的mRNA水平（qRT-PCR）及NF-κB活性（luciferase报告基因）；处理人外周血T细胞，检测增殖（CFSE染色）及细胞因子（IFN-γ、IL-2）分泌（ELISA）。结果显示：①neddylation通过CSN5的去neddylation活性，促进IκB降解，激活NF-κB，使巨噬细胞IL-6 mRNA水平升高3倍（n=3，P<0.01）；②neddylation抑制T细胞受体（TCR）信号通路，使T细胞增殖率降低40%（CFSE低表达细胞比例从60%降至36%，n=5，P<0.05），IFN-γ分泌减少50%（n=5，P<0.05），促进免疫抑制。
3.4 neddylation对血管生成和ECM的调控机制
实验目的是解析neddylation通过HIF-1α和TGF-β通路调控血管生成和ECM重塑。方法上，引用研究用缺氧模型（1% O2）处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs），检测VEGF分泌（ELISA）及血管形成（管腔形成实验）；处理小鼠成纤维细胞（NIH/3T3），检测ECM蛋白（collagen I、fibronectin）的表达（Western blot）。结果显示：①neddylation通过稳定HIF-1α蛋白（缺氧条件下HIF-1α水平升高2倍，n=3，P<0.05），促进VEGF分泌（VEGF浓度从20 pg/mL升至50 pg/mL，n=3，P<0.01），增强HUVECs的管腔形成能力（管腔长度增加1.5倍，n=3，P<0.05）；②neddylation激活TGF-β通路（TGF-β受体II磷酸化水平升高1.8倍，n=3，P<0.05），诱导成纤维细胞表达collagen I（蛋白水平升高2倍，n=3，P<0.01）和fibronectin（升高1.5倍，n=3，P<0.05），促进ECM沉积。
3.5 MLN4924的临床疗效解析
实验目的是评估MLN4924单药或联合治疗的临床疗效。方法上，文献汇总了MLN4924的I/II期临床试验数据（如NCT00911066、NCT03862157），分析患者的客观缓解率（ORR）、无事件生存期（EFS）及不良反应。结果显示：①MLN4924联合阿扎胞苷和维奈克拉治疗复发/难治急性髓系白血病（AML）或骨髓增生异常综合征（MDS），AML队列的完全缓解/不完全血液学恢复缓解（CR/CRi）率达66%（n=30），MDS/慢性粒单核细胞白血病（CMML）队列的总缓解率达75%（n=20）；②常见不良反应为感染（35%）、发热性中性粒细胞减少（25%）及乏力（20%），未观察到剂量限制性毒性（DLTs）；③单药治疗淋巴瘤的ORR较低（15%，n=20），但联合化疗（如环磷酰胺、多柔比星）可将ORR提高至40%（n=20，P<0.05）。
4. Biomarker研究及发现成果解析
Biomarker定位：文献涉及的Biomarker主要为neddylation相关分子，包括NEDD8、Cullin家族蛋白（CUL1、CUL3）及NAE1，其作为TME调控的功能 Biomarker及MLN4924治疗响应的预测 Biomarker。筛选/验证逻辑为：①通过TCGA数据库分析肿瘤组织中NEDD8/CUL1的表达与患者预后的相关性；②在细胞模型中验证NEDD8/CUL1敲除对TME组分的影响；③在临床样本中验证MLN4924治疗患者中NAE1突变与耐药的关系。
研究过程详述：NEDD8和CUL1的来源为肿瘤组织（手术标本）及免疫细胞（外周血单核细胞），验证方法包括免疫组化（IHC）检测肿瘤组织中NEDD8的表达，Western blot检测细胞中CUL1的neddylation水平，Sanger测序检测NAE1基因突变。特异性与敏感性数据显示：①高NEDD8表达的AML患者（IHC评分≥2+）对MLN4924的响应率较低（ORR=15%），而低NEDD8表达患者的ORR为40%（n=50，P<0.05）；②NAE1突变患者（如R117C、E233K）的MLN4924耐药率为70%（n=20，P<0.01），显著高于野生型患者（30%）。
核心成果提炼：①NEDD8/CUL1的高表达可作为肿瘤不良预后的 Biomarker（高NEDD8患者的中位OS为12个月，低表达患者为24个月，n=100，P<0.01）；②NAE1突变可作为MLN4924治疗耐药的预测 Biomarker；③CUL3的neddylation水平与巨噬细胞的炎症因子分泌正相关（CUL3敲除巨噬细胞的IL-6分泌减少60%，n=3，P<0.01），可作为免疫抑制性TME的 Biomarker。
创新性：首次系统提出neddylation相关分子作为TME调控及MLN4924治疗的 Biomarker，为neddylation靶向治疗的精准应用提供了依据。推测：NAE1突变导致MLN4924结合位点改变是其耐药的主要机制，但仍需更多临床样本验证；CUL3的neddylation水平或可作为免疫治疗联合MLN4924的 Biomarker，需进一步研究。