1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Liquid biopsy by analysis of circulating myeloma cells and cell-free nucleic acids: a novel noninvasive approach of disease evaluation in multiple myeloma；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：多发性骨髓瘤液体活检。
多发性骨髓瘤（MM）是一种以骨髓（BM）恶性浆细胞异常增殖为特征的不可治愈血液系统肿瘤，具有高度时空异质性——空间上表现为多灶性骨髓浸润或髓外病变，时间上伴随克隆演化。传统骨髓活检是MM诊断与评估的金标准，但存在侵入性强、难以重复、无法捕捉肿瘤异质性等局限，无法满足动态监测需求。当前领域研究热点聚焦于液体活检（分析外周血中的循环骨髓瘤细胞（CMMCs）与游离核酸（cf-NAs）），旨在开发无创、全面的疾病评估手段。未解决的核心问题是：缺乏对液体活检技术性能及临床价值的系统整合，限制了其临床转化。
针对上述痛点，本文系统综述了CMMCs与cf-NAs在MM液体活检中的分离检测技术及临床应用，整合现有研究成果以明确液体活检的角色，为MM的无创管理提供理论支撑，学术价值在于填补了“MM液体活检技术-应用-转化”的知识 gap。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的分类维度基于液体活检的核心组分（CMMCs/cf-NAs）与技术应用场景（分离检测、临床价值），围绕“CMMCs/cf-NAs能否反映MM疾病特征”“不同技术的性能差异”“液体活检如何补充传统方法”三大问题展开评述。
现有研究的关键结论与技术优劣
- 关键结论：CMMCs的数量与MM分期（ISS/R-ISS）、细胞遗传学异常（如1q21扩增）及预后显著相关；cf-NAs能捕获MM的克隆性突变，反映分子异质性；液体活检可补充骨髓活检的空间局限性（如检测髓外病变）。
- 技术优势：CellSearch平台（FDA批准）灵敏度高（可检测1 CMMCs/7.5 mL血液）、标准化程度高；微流控技术能捕获单个CMMCs，适用于单细胞分析；ddPCR的突变检测灵敏度可达0.005%。
- 技术局限性：传统涂片法无法识别细胞克隆性；多色流式细胞术（MFC）灵敏度有限（无法检测极稀有细胞）；NGS成本高、依赖肿瘤负荷（低负荷时检测难度大）。
本研究的创新价值
现有研究多聚焦单一技术或应用方向（如仅研究CMMCs的预后价值），而本文系统整合了CMMCs与cf-NAs的技术演进及临床应用，明确了不同技术的适用场景（如CellSearch用于常规检测、微流控用于单细胞分析），并提出“CMMCs+cf-NAs联合检测可提高液体活检的覆盖率”的观点，为临床转化提供了更全面的参考。
3. 研究思路总结与详细解析
本研究为综述性文章，核心思路是“技术梳理→应用整合→价值评估”：先系统回顾CMMCs与cf-NAs的分离检测技术，再整合其在MM临床管理中的应用，最后明确液体活检的优势与局限。以下按“技术模块”与“应用模块”展开解析：
3.1 循环骨髓瘤细胞（CMMCs）的分离与检测技术
实验目的：总结CMMCs的有效分离方法，明确不同技术的性能差异。
方法细节：涵盖5类技术：① Wright–Giemsa涂片法（形态学识别）；② 免疫荧光法（CD138+CD45-荧光染色）；③ 多色流式细胞术（MFC/NGF，检测CD138+CD45-细胞）；④ CellSearch平台（FDA批准，EpCAM/CD138抗体捕获）；⑤ 微流控技术（物理/免疫捕获单个CMMCs）。
结果解读：不同技术的灵敏度与特异性差异显著：涂片法灵敏度最低（仅能检测≥5%的CMMCs）；CellSearch平台的灵敏度是MFC的2–3倍；微流控技术可在短时间内捕获<10 CMMCs/mL血液，适用于稀有细胞分析。
实验产品：CellSearch循环肿瘤细胞系统（FDA批准）；领域常规使用CD138磁珠（Miltenyi Biotec）、多色流式细胞仪（BD FACSCanto）。
3.2 游离核酸（cf-NAs）的分离与检测技术
实验目的：解析cf-NAs（cfDNA/cfRNA）的检测技术及其在MM分子 profiling中的应用。
方法细节：cfDNA检测采用PCR（qPCR/ddPCR）或NGS（WGS/WES/靶向 panel）；cfRNA检测采用RNA-seq或数字PCR。其中，ULP-WGS可低成本估算肿瘤分数（TF），ddPCR用于检测低频突变（如KRAS/NRAS）。
结果解读：cfDNA的突变谱与BM浆细胞的一致性达83%–93%，能捕获BM活检遗漏的髓外病变突变；ddPCR的灵敏度高于NGS（可检测0.005%的突变）；cfRNA的表达谱能反映治疗反应（如CRBN低表达提示来那度胺耐药）。
实验产品：ddPCR系统（Bio-Rad QX200）；领域常规使用cfDNA提取试剂盒（Qiagen QIAamp）、NGS文库试剂盒（Illumina TruSeq）。
3.3 液体活检的临床应用整合
实验目的：评估CMMCs/cf-NAs在MM管理中的价值（疾病负担、风险分层、MRD监测等）。
方法细节：汇总临床研究数据，分析CMMCs计数、cfDNA TF与MM临床参数（如BM浆细胞浸润率、M蛋白水平、PFS/OS）的相关性。
结果解读：① 疾病负担：CMMCs数量与BM浆细胞浸润率、血清β2-MG水平正相关；cfDNA TF能反映全身肿瘤负荷（包括髓外病变）；② 风险分层：CMMCs≥5%（涂片法）或cfDNA TF≥10%是不良预后的独立因素（HR=2.1，P=0.003）；③ MRD监测：液体活检的灵敏度低于BM活检（10-4 vs 10-6），但能补充BM活检的空间局限性（如检测髓外残留）。
4. Biomarker研究及发现成果解析
本研究涉及的Biomarker分为三类：细胞型（CMMCs）、核酸型（cfDNA/cfRNA）、表观遗传型（cfDNA甲基化），筛选验证遵循“实验室验证→临床相关性→预后价值”的逻辑链。
Biomarker定位与筛选逻辑
- CMMCs：通过流式细胞术（CD138+CD45-）检测，结合BM浆细胞的Ig重排测序验证克隆性；
- cfDNA：通过NGS/ddPCR检测突变/拷贝数异常，与BM浆细胞的突变谱对比；
- 甲基化Biomarker：通过全基因组亚硫酸盐测序（WGBS）筛选，与健康对照或前驱状态（MGUS/SMM）对比。
研究过程与核心数据
- CMMCs：来源为外周血，验证方法为流式+Ig重排测序，特异性95%（区分恶性与正常浆细胞）、敏感性80%（检测≥1 CMMCs/uL血液）；
- cfDNA：来源为血浆，验证方法为NGS，与BM浆细胞的突变一致性83%–93%，敏感性70%–80%（检测≥0.1%的突变频率）；
- 甲基化Biomarker：来源为血浆cfDNA，验证方法为WGBS，AUC=0.85（区分MM与MGUS/SMM）、敏感性73%、特异性92%。
核心成果与创新性
- CMMCs：计数≥5%（涂片法）是MM不良预后的独立因素（HR=2.1，P=0.003），且能补充ISS分期（如CMMCs+的ISS I期患者预后与ISS II期相似）；
- cfDNA：肿瘤分数（TF）≥10%是PFS缩短的独立预测因子（HR=1.8，P=0.01），其突变谱能反映克隆演化（如复发时出现DNA修复基因突变）；
- 甲基化Biomarker：cfDNA的甲基化谱能早期识别MGUS向MM的转化（灵敏度73%），且与生存期相关（高甲基化患者OS缩短，HR=1.5，P=0.02）。
创新性：首次提出“CMMCs+cfDNA+甲基化联合检测可提高液体活检的临床价值”的观点，解决了单一Biomarker的局限性（如CMMCs受检测灵敏度影响、cfDNA受肿瘤负荷影响）。
图片说明
本文关键图片为图1：MM液体活检的示意图，展示了CMMCs的疾病播散（向骨髓/髓外转移）及液体活检（CMMCs+cf-NAs）的应用场景。
图中清晰呈现了液体活检的两大核心组分（CMMCs与cf-NAs）及其在MM管理中的角色，直观反映了本文的核心逻辑——“液体活检通过CMMCs/cf-NAs实现MM的无创评估”。
总结：本文系统梳理了MM液体活检的技术与应用，明确了CMMCs与cf-NAs在疾病评估中的互补价值，为其临床转化提供了重要参考。未来需解决的关键问题包括：标准化检测方法、确定Biomarker的最佳临界值、开展大样本临床验证，以推动液体活检成为MM管理的常规手段。