GSDMD 抗体横评:切割片段才是关键(人源样品)
做细胞焦亡的同学,WB 最纠结的是 GSDMD 切割条带:全长和 N 端片段挨得不算远,抗体识别区域不同,看到的图完全两回事。有人跑出来全长很深却找不到切割带,是真没焦亡,还是抗体压根不认 N 端?这个问题不先想清楚,结论很容易写反。
GSDMD 是 gasdermin 家族的成孔蛋白,炎症小体激活后被 caspase-1 或 caspase-4/5/11 切割,N 端片段插进细胞膜打孔,细胞内容物外泄,这就是焦亡的执行步骤。所以查焦亡不能只看上游因子活没活,GSDMD 切割几乎是必看的收尾证据。
这一组产品针对的抗原是 GSDMD,反应种属:Human。下面把各款的特点摊开讲。
各款特点,挨个说
Abcam 的 Ab215203(Anti-cleaved N-terminal GSDMD antibody [EPR20829-408]),Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000。
proteintech 这款 20770-1-AP,品名是 GSDMD Polyclonal antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。
再看 Abcam 的 Ab210070:Anti-GSDMD antibody [EPR19829],Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000。
到底怎么选?
先确认抗体识别的是 N 端、C 端还是两者都认:看切割事件选 N 端识别的产品,看总蛋白选 C 端或全长抗体。WB 建议用高分辨率胶把全长(约 53 kDa)和 N 端(约 30 kDa)分开。样品处理加蛋白酶抑制剂并尽快裂解,切割片段降解很快。做上游机制搭配 cleaved caspase-1、IL-1β 成熟体一起看更完整。
相关产品列表
| 品牌 | 货号 | 品名 | 抗原名称 |
|---|---|---|---|
| Abcam | Ab215203 | Anti-cleaved N-terminal GSDMD antibody [EPR20829-408] | GSDMD |
| proteintech | 20770-1-AP | GSDMD Polyclonal antibody | GSDMD |
| Abcam | Ab210070 | Anti-GSDMD antibody [EPR19829] | GSDMD |