GSDMD 抗体横评:切割片段才是关键(人源样品)

GSDMD 抗体横评:切割片段才是关键(人源样品)

做细胞焦亡的同学,WB 最纠结的是 GSDMD 切割条带:全长和 N 端片段挨得不算远,抗体识别区域不同,看到的图完全两回事。有人跑出来全长很深却找不到切割带,是真没焦亡,还是抗体压根不认 N 端?这个问题不先想清楚,结论很容易写反。

GSDMD 是 gasdermin 家族的成孔蛋白,炎症小体激活后被 caspase-1 或 caspase-4/5/11 切割,N 端片段插进细胞膜打孔,细胞内容物外泄,这就是焦亡的执行步骤。所以查焦亡不能只看上游因子活没活,GSDMD 切割几乎是必看的收尾证据。

Abcam Ab215203
图:Abcam Ab215203 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页
Abcam Ab210070
图:Abcam Ab210070 应用验证图|图源:Abcam 官方产品页

这一组产品针对的抗原是 GSDMD,反应种属:Human。下面把各款的特点摊开讲。

各款特点,挨个说

Abcam 的 Ab215203(Anti-cleaved N-terminal GSDMD antibody [EPR20829-408]),Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000。

proteintech 这款 20770-1-AP,品名是 GSDMD Polyclonal antibody,Rabbit / IgG 来源,属多克隆抗体,验证应用覆盖 WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC。

再看 Abcam 的 Ab210070:Anti-GSDMD antibody [EPR19829],Rabbit / IgG 来源,属单克隆抗体,验证应用覆盖 WB。厂家给到的 WB 推荐稀释是 1/1000。

到底怎么选?

先确认抗体识别的是 N 端、C 端还是两者都认:看切割事件选 N 端识别的产品,看总蛋白选 C 端或全长抗体。WB 建议用高分辨率胶把全长(约 53 kDa)和 N 端(约 30 kDa)分开。样品处理加蛋白酶抑制剂并尽快裂解,切割片段降解很快。做上游机制搭配 cleaved caspase-1、IL-1β 成熟体一起看更完整。

相关产品列表

品牌 货号 品名 抗原名称
Abcam Ab215203 Anti-cleaved N-terminal GSDMD antibody [EPR20829-408] GSDMD
proteintech 20770-1-AP GSDMD Polyclonal antibody GSDMD
Abcam Ab210070 Anti-GSDMD antibody [EPR19829] GSDMD

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