1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：Interleukin-10 and soluble tumor necrosis factor receptor II are potential biomarkers of Plasmodium falciparum infections in pregnant women: a case-control study from Nanoro, Burkina Faso；发表期刊：Biomarker Research；影响因子：未公开；研究领域：妊娠恶性疟原虫感染生物标志物研究。
在撒哈拉以南非洲，约2800万孕妇面临恶性疟原虫感染风险，妊娠疟疾可导致 maternal贫血、低出生体重、早产甚至死产等严重结局。然而，传统诊断方法（快速诊断试验、显微镜检查）对低外周血寄生虫密度、无症状感染的敏感性极低——仅约40%的分娩期PCR阳性患者能通过显微镜检出寄生虫。尽管现有研究提出炎症、血管生成、脂质代谢相关生物标志物可能辅助诊断，但多数研究仅关注单一标志物，缺乏多通路标志物的组合验证，且未针对不同孕次女性（初产妇 vs 经产妇）的免疫状态差异评估诊断性能，尤其对临床意义重大的亚显微感染（显微镜无法检出）的诊断价值尚不明确。本研究旨在填补这一空白，通过病例对照研究评估6种潜在生物标志物对妊娠疟疾的诊断价值，为构建高效的组合诊断模型提供依据。
2. 文献综述解析
作者首先系统回顾妊娠疟疾的病理机制：恶性疟原虫通过表达变异表面抗原VAR2CSA，结合胎盘绒毛膜上皮细胞的硫酸软骨素A（CSA），导致寄生虫在胎盘滞留（胎盘疟疾），引发局部炎症反应（单核细胞浸润、细胞因子失衡）和血管损伤。接着，作者指出传统诊断方法的局限——快速诊断试验（RDT）依赖于疟原虫抗原（如HRP2）检测，但抗原持续存在可能导致假阳性；显微镜检查对低密度感染（<100寄生虫/μL）敏感性不足；实时聚合酶链反应（PCR）虽敏感但因技术门槛和成本难以在基层推广。
随后，作者将现有潜在生物标志物分为三类：炎症相关（IL-10、TNF-α、sTNF-RII）、血管生成相关（sFlt-1）、脂质代谢相关（瘦素、载脂蛋白B）。既往研究显示，IL-10（具有抗炎和免疫调节作用）和sTNF-RII（通过中和TNF-α发挥抗炎作用）水平在妊娠疟疾患者中升高，但缺乏二者组合应用的研究；sFlt-1（血管内皮生长因子受体）虽与胎盘血管损伤相关，但未明确其与妊娠疟疾的特异性关联；瘦素和载脂蛋白B的研究结果不一致，诊断价值未确认。
基于此，作者提出本研究的创新点：1）验证多通路标志物的诊断价值，筛选出最具潜力的组合；2）评估组合模型对不同孕次女性的诊断性能；3）探索标志物与寄生虫密度、临床结局（出生体重）的关联，填补组合生物标志物在妊娠疟疾诊断中的应用空白。
3. 研究思路总结与详细解析
本研究以“评估多通路生物标志物对妊娠疟疾的诊断价值，构建组合模型”为目标，核心科学问题包括：① 炎症、血管生成、脂质代谢标志物能否区分妊娠疟疾感染与未感染状态？② 组合标志物模型对不同孕次女性及亚显微感染的诊断性能如何？③ 标志物水平与寄生虫密度、出生体重是否相关？ 技术路线遵循“病例对照设计→样本收集→实验室检测→统计分析→模型构建”的闭环逻辑。
3.1 研究设计与样本选择
实验目的：确定妊娠疟疾病例与对照样本，为生物标志物评估提供基础。
方法细节：本研究嵌套在“社区-based疟疾筛查与治疗（COSMIC）”集群随机对照试验（1800名孕妇）中，通过实时PCR检测分娩时外周血滤纸片的18S rRNA，筛选出79例疟疾阳性（病例组）和81例阴性（对照组）孕妇；收集其二 trimester（首次 antenatal care，ANC）、三 trimester（第二次/第三次 ANC）及分娩时的静脉血（EDTA抗凝），并在分娩时采集胎盘活检。
结果解读：最终430份血浆样本用于生物标志物分析。病例组与对照组的平均年龄（25.4±6.0岁）、分娩时血红蛋白水平无显著差异；病例组初产妇比例（25.3%）略高于对照组（19.8%），但无统计学意义（P=0.371）。所有参与者均无先兆子痫症状，且未使用抗疟药物外的免疫调节剂。
产品关联：文献未提及具体样本收集产品，领域常规使用EDTA抗凝管收集静脉血，Whatman 3MM/1MM滤纸片收集指血样本。
3.2 疟疾感染状态与胎盘组织学检测
实验目的：明确外周血与胎盘的疟疾感染状态，作为生物标志物分析的“金标准”。
方法细节：外周血感染通过实时PCR（检测18S rRNA，最低检测限1寄生虫/μL）和显微镜检查（Giemsa染色，计数200-500白细胞，未检出寄生虫则观察100个高倍视野）联合诊断；胎盘感染通过组织学分析：胎盘活检经10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、HE染色后，分为急性感染（有寄生虫无色素）、慢性感染（有寄生虫和色素）、既往感染（仅色素）、无感染四类。
结果解读：分娩时，病例组仅43%（34/79）的样本显微镜阳性，对照组仅2.5%（2/81）显微镜阳性；11.9%（8/67）的外周感染孕妇合并胎盘活动性感染（急性/慢性），对照组仅3%（3/81）。胎盘组织学结果显示，44例孕妇存在绒毛膜羊膜炎（胎盘炎症），但所有生物标志物水平与绒毛膜羊膜炎无显著关联（P>0.05）。
产品关联：实时PCR使用Nuclisens EasyMag系统提取DNA，PCR试剂未提及；显微镜检查采用3% Giemsa染液染色45-60分钟。
3.3 生物标志物酶联免疫吸附试验检测
实验目的：定量检测6种潜在生物标志物的血浆水平，筛选与妊娠疟疾相关的标志物。
方法细节：采用R&D Systems的Quantikine ELISA试剂盒，检测血浆中IL-10（检测下限3.9pg/mL）、TNF-α（5.5pg/mL）、sTNF-RII（2.3pg/mL）、sFlt-1（13.3pg/mL）、瘦素（7.8pg/mL）、载脂蛋白B（9.97ng/mL）的水平；低于检测限的样本取检测限的一半值计入统计。
结果解读：炎症标志物IL-10和sTNF-RII在感染组各时间点（二 trimester、三 trimester、分娩）均显著高于未感染组（P<0.001）；TNF-α因多数样本低于检测限（感染组127/176、未感染组238/254），未纳入后续分析；血管生成标志物sFlt-1、脂质代谢标志物瘦素、载脂蛋白B无一致的感染相关性（仅瘦素在三 trimester感染组略高，但二 trimester无差异）。敏感性分析显示，排除超出标准曲线的sFlt-1（7.7%样本）、sTNF-RII（7.9%样本）后，结果无显著变化。
产品关联：实验所用关键产品：R&D Systems的Quantikine ELISA试剂盒（IL-10、TNF-α、sTNF-RII、sFlt-1、瘦素、载脂蛋白B）。
3.4 统计分析与组合模型构建
实验目的：关联生物标志物与感染状态、寄生虫密度、出生体重，构建并验证诊断模型。
方法细节：使用Stata 14.1进行回归分析（调整村庄集群效应），评估标志物与感染状态、寄生虫密度的关联；将样本随机分为测试集（n=80）和验证集（n=80），基于测试集的标志物分布确定cutoff值：IL-10<30pg/mL得0分、30-75pg/mL得1分、>75pg/mL得2分；sTNF-RII<3700pg/mL得0分、>3700pg/mL得1分。通过逻辑回归计算模型在验证集的敏感性和特异性。
结果解读：组合模型性能：初产妇的敏感性达88.9%（95%CI 45.7-98.7%）、特异性83.3%（95%CI 57.1-94.9%）；经产妇（ secundigravidae）敏感性降至81.8%，但特异性保持100%；多产妇（multigravidae）敏感性最低（56.5%），但特异性仍达94.3%。亚显微感染检测：验证集中，2/3的经产妇亚显微感染（显微镜阴性、PCR阳性）、5/12的多产妇亚显微感染可被模型检出。标志物与临床结局的关联：IL-10（P<0.001）、sTNF-RII（P=0.003）与显微镜下寄生虫密度正相关；分娩时IL-10水平与出生体重负相关（P=0.006），但调整孕次和年龄后无显著关联（P>0.05）。
4. Biomarker 研究及发现成果解析
Biomarker 定位与筛选逻辑
本研究聚焦炎症相关生物标志物——白细胞介素-10（IL-10，细胞因子）和可溶性肿瘤坏死因子受体II（sTNF-RII，可溶性受体）。筛选逻辑为：系统综述选候选标志物→病例对照研究验证关联→构建组合模型评估诊断性能：首先通过系统综述选取6种多通路标志物（炎症、血管生成、脂质代谢），然后通过病例对照研究验证其与妊娠疟疾的关联，最终筛选出关联最显著的IL-10和sTNF-RII构建组合模型。
研究过程详述
Biomarker 来源：孕妇二 trimester、三 trimester及分娩时的静脉血血浆。
验证方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）定量检测，使用R&D Systems的Quantikine试剂盒，检测下限分别为3.9pg/mL（IL-10）、2.3pg/mL（sTNF-RII）。
特异性与敏感性：组合模型对初产妇显微镜确诊感染的敏感性为88.9%（95%CI 45.7-98.7%）、特异性83.3%（95%CI 57.1-94.9%）；对经产妇亚显微感染的敏感性为66.7%（2/3），无假阳性；对多产妇亚显微感染的敏感性为41.7%（5/12），假阳性率5.9%（3/51）。
与寄生虫密度的关联：IL-10（P<0.001）、sTNF-RII（P=0.003）与显微镜下寄生虫密度呈正相关（每增加1个log10寄生虫/μL，IL-10增加0.32pg/mL，sTNF-RII增加0.15pg/mL）。
核心成果提炼
- 诊断价值：IL-10和sTNF-RII是妊娠恶性疟原虫感染的潜在生物标志物，其组合模型对初产妇显微镜确诊的疟疾感染具有高敏感性（88.9%）和较好特异性（83.3%），为初产妇（最易发生严重妊娠疟疾）的早期诊断提供了新工具。
- 亚显微感染检测：组合模型对经产妇和多产妇的亚显微感染有一定检测能力（经产妇66.7%、多产妇41.7%），弥补了传统方法对低密度感染的敏感性不足。
- 病理机制关联：IL-10和sTNF-RII水平与寄生虫密度正相关，提示二者参与妊娠疟疾的炎症反应；分娩时IL-10水平与出生体重负相关，可能反映炎症对胎儿生长的抑制作用。
本研究首次构建了针对不同孕次女性的组合生物标志物模型，为妊娠疟疾的精准诊断提供了关键依据。未来需扩大样本量验证模型的普适性，并纳入其他炎症标志物（如补体C5a、IP-10）进一步提升敏感性，以应对基层常见的亚显微感染和合并感染（如细菌感染）的干扰。