1. 领域背景与文献引入
文献英文标题：AXL in myeloid malignancies – an elusive target?；发表期刊：Biomarker Research（Biomark Res）；影响因子：未公开；研究领域：髓系恶性肿瘤（急性髓系白血病为主）的AXL受体表达及靶向治疗机制研究。
TAM受体酪氨酸激酶家族（Tyro3、AXL、MerTK）是成人组织稳态的关键调控因子，其中AXL于1991年在2例慢性髓系白血病（CML）患者中被首次发现，后续研究证实其在多种实体瘤（如肺癌、乳腺癌）及血液瘤中过表达，与上皮-间质转化（EMT）、血管生成、化疗耐药及免疫逃逸密切相关。急性髓系白血病（AML）作为髓系恶性肿瘤的主要类型，以未分化髓系前体细胞克隆扩增为特征，尽管DNA甲基化抑制剂、靶向药物（如FLT3抑制剂）等新疗法问世，但传统化疗的5年生存率仍低于30%，亟需挖掘更精准的治疗靶点。
AXL因在AML中的“过表达”及“预后不良关联”（如超过50% AML患者存在AXL mRNA过表达，蛋白表达是独立预后不良因素）成为热门靶点，多款AXL抑制剂（如Bemcentinib）进入临床研究。然而，现有研究对AXL在AML患者髓母细胞中的蛋白表达水平仍存争议——部分小样本研究称AXL过表达，但缺乏大样本验证；同时，AXL抑制剂的疗效是否真的依赖肿瘤细胞的AXL表达，尚未明确。针对这一空白，本文通过检测6种AML细胞系及25例髓系肿瘤患者的AXL表达，试图澄清AXL在AML中的真实角色，为靶向治疗提供理论依据。
2. 文献综述解析
作者对现有研究的评述逻辑围绕“AXL的肿瘤功能→AML中的表达争议→抑制剂疗效机制”展开：
- AXL的肿瘤功能：现有研究一致认为AXL通过结合配体GAS6或膜磷脂酰丝氨酸（PtdSer），促进肿瘤细胞存活、耐药及免疫抑制（如抑制巨噬细胞吞噬、下调MHCI表达）；
- AML中的表达争议：早期研究基于mRNA水平提出“AXL过表达”，但蛋白水平的验证样本量小（多<10例），且检测方法（如免疫组化）的特异性不足；
- 抑制剂疗效机制：临床研究显示Bemcentinib联合低剂量阿糖胞苷可延长复发/难治AML患者生存期（OS 13.3个月vs历史对照4.5个月），但应答患者的肿瘤细胞AXL表达并未显著升高，提示疗效可能依赖非直接机制。
本文的创新价值在于：首次通过大样本患者（25例）及细胞系数据，明确AXL在AML髓母细胞中的低表达，挑战了“AXL过表达是AML靶向治疗基础”的传统认知，为AXL抑制剂的疗效机制（如免疫调节）提供了新的研究方向。
3. 研究思路总结与详细解析
整体框架：以“AXL在AML中的真实表达水平”为核心科学问题，采用“细胞系筛选→患者样本验证→短期培养稳定性验证”的闭环路线，通过流式细胞术（表面表达）和蛋白质免疫印迹（Western blot，细胞内蛋白）定量分析AXL表达，最终揭示AXL在AML中的低表达特征。
3.1 AML细胞系的TAM受体表达检测
实验目的：明确6种AML细胞系（Mono-Mac-1、KG-1、OCI-AML2、OCI-AML3、HL-60、THP-1）中Tyro3、AXL、MerTK的表面及蛋白表达水平。
方法细节：采用两种流式细胞仪（NovoCyte Quanteon、BD FACS Canto）检测细胞表面受体表达；通过蛋白质免疫印迹检测细胞内蛋白，以乳腺癌细胞系MDA-MB-231为阳性对照，β-肌动蛋白（β-actin）为内参。
结果解读：流式结果显示，6种细胞系均未检测到AXL表面表达；Western blot结果显示，仅2种细胞系存在极弱的AXL蛋白条带（灰度值远低于阳性对照），而Tyro3、MerTK在部分细胞系中存在不同程度表达（如MerTK在Mono-Mac-1中表达较高）。
实验所用关键产品：文献未提及具体实验产品，领域常规使用流式细胞仪（如BD、NovoCyte）、蛋白质免疫印迹试剂（如内参抗体、蛋白分子量标准）。
3.2 髓系肿瘤患者骨髓髓母细胞的TAM受体表达检测
实验目的：评估25例髓系肿瘤患者（22例AML、2例CML blast crisis、1例CMML转化AML）骨髓髓母细胞中AXL等受体的表面表达水平。
方法细节：采集新鲜骨髓样本，通过流式细胞术分析髓母细胞（CD117+、CD13±、CD34±）的受体表达，以荧光减一（FMO）对照设门，计算中位荧光强度差（ΔMFI，即目标抗体与FMO对照的荧光差值）。
结果解读：25例患者中，MerTK的ΔMFI均值最高（589.0±100.4），Tyro3次之（235.1±43.12），而AXL的ΔMFI均值极低（43.4±22.0）——20例患者未检测到AXL表达（ΔMFI≤68），仅5例存在极弱表达。
实验所用关键产品：文献未提及具体实验产品，领域常规使用流式细胞术抗体（如CD117、CD13、CD34抗体）及FMO对照试剂。
3.3 短期培养对AXL表达的影响
实验目的：探究短期培养（48小时）是否会改变AML患者髓母细胞的AXL表达。
方法细节：选取3例患者样本，解冻后培养48小时（避免解冻应激），通过流式细胞术检测AXL表达。
结果解读：培养后AXL的ΔMFI较新鲜样本略有升高，但仍维持极低水平（ΔMFI<100），未出现显著表达。
实验所用关键产品：文献未提及具体实验产品，领域常规使用细胞培养试剂（如RPMI 1640培养基、胎牛血清）。
4. Biomarker研究及发现成果解析
Biomarker定位与验证逻辑
本文研究的Biomarker为AXL受体（TAM家族酪氨酸激酶受体），作为髓系恶性肿瘤的潜在治疗靶点Biomarker。筛选/验证逻辑为“AML细胞系初步筛选→大样本患者验证→短期培养稳定性验证”，逐步明确AXL在AML中的表达特征。
研究过程与数据
- Biomarker来源：6种AML细胞系、25例髓系肿瘤患者骨髓髓母细胞；
- 验证方法：流式细胞术（表面表达，ΔMFI定量）、蛋白质免疫印迹（细胞内蛋白表达）；
- 特异性与敏感性：25例患者中AXL阴性率80%（20/25），ΔMFI均值43.4±22.0（远低于MerTK和Tyro3）；短期培养后表达仍极低，稳定性强。
核心成果与创新
本文的核心发现是：AXL在AML患者骨髓髓母细胞中的表达水平极低（甚至缺失），直接挑战了“AXL过表达是AML靶向治疗基础”的传统认知。
- 功能关联：尽管AXL在肿瘤细胞中表达低，但AXL抑制剂的疗效可能不依赖肿瘤细胞的AXL表达，而是通过免疫调节机制发挥作用——如之前研究显示，Bemcentinib联合低剂量阿糖胞苷可激活AML患者的CD8+T细胞，恢复肿瘤微环境的炎症反应，从而延长生存期；
- 创新性：首次通过25例大样本患者数据明确AXL在AML髓母细胞中的低表达，为AXL抑制剂的机制研究提供了新方向（从“直接靶向肿瘤细胞”转向“调节免疫微环境”）；
- 统计学结果：患者样本n=25，AXL阴性率80%（20/25），ΔMFI均值43.4±22.0（趋势显著，P值未明确但差异明显）。
综上，本文通过严谨的细胞系与患者样本研究，揭示了AXL在AML中的“低表达”特征，为AXL抑制剂的临床应用提供了重要修正——其疗效可能与AXL表达无关，而更依赖免疫激活。这一发现将推动AXL靶向治疗从“肿瘤细胞靶向”向“免疫微环境调节”的范式转变，为AML的精准治疗提供新思路。