内参条带不该是每天的开盲盒
Anti-GAPDH antibody [6C5]，6C5 克隆，36 kDa 单一条带
跑完胶，转完膜，显影。目的条带挺漂亮。
然后你去看最边上那条内参，它比昨天浅了一半。
样本还是那批样本，上样量也还是 10 微克。于是你开始回想，是不是这批裂解液放久了，是不是转膜的时候夹层没压紧，是不是昨天洗膜多洗了五分钟。
大部分时候，原因比这些更朴素。内参没换过，但抗体的状态变了。
内参为什么容易翻车
内参抗体的用量是全实验室最大的。用得最多，冻融次数也最多。
GAPDH 尤其如此。它在糖酵解里干活，几乎所有细胞都高表达，稀释比动不动就拉到 1/10000。浓度低、次数多，一管抗体撑过半年，效价掉一半是常事。
所以内参条带忽深忽浅，先怀疑抗体有没有被反复冻融，再怀疑样本。
6C5 这株克隆
Ab8245 用的是 6C5 克隆，小鼠单克隆，IgG1 亚型，识别人、小鼠、大鼠的 GAPDH。
免疫原是大肠杆菌里表达的全长兔 GAPDH，登录号 P46406。用 Protein A 亲和纯化，液体剂型，缓冲液是 pH 7.4 的 PBS，含 0.09% 叠氮钠。
验证应用是 WB 和 IF/ICC。WB 推荐稀释 1/500 到 1/10000，ICC/IF 用 1 到 5 微克每毫升。
6C5 是克隆号，也是很多实验室内参柜里的默认选项。人、小鼠、大鼠的裂解液跑下来，36 kDa 位置都是干净的单一条带，不拖尾，也很少冒杂带。
上样量这件事
内参的作用是证明每孔上了差不多的蛋白。它证明不了别的。
有人看到内参深，就以为蛋白上得多，其实可能只是这支抗体对某个样本更敏感。有人内参浅了就补上样，最后目的条带的差异全被抹平。
比较稳妥的做法是上样前定一次量，BCA 或 Bradford 都行，之后整批实验不再改。内参只用来确认这一步没出岔子。
一条很土但有效的规矩
拿到新抗体，第一天就分装。十微升一管，冻在负二十度，用时拿一管出来，用完就扔。
6C5 这种用得勤的抗体，分装带来的差别，比换任何品牌的稀释液都明显。
叠氮钠那点浓度不影响 WB，但做细胞实验要避开。要染活细胞，另找无防腐剂的剂型。
内参稳了，实验才有得比。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | GAPDH |
| 验证应用 | WB, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | WB 1/500 - 1/10000；ICC/IF 1-5 µg/mL |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
相关产品
点击货号或品名可查看生知库产品页的完整参数与报价。
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。