β-actin 跑出两条带，别急着扔抗体

Anti-beta Actin，十个种属通用，WB 与 IHC 双验证

四十二 kDa 附近，本该是一条干净的黑带。

结果你看到两条，靠得很近，一条深一条浅。或者一条正好在 42，另一条鬼鬼祟祟地躺在 45。

第一反应是把抗体扔了重新买。先别急，这件事有一半的概率跟抗体无关。

图 1　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

双带从哪来

β-actin 有几个同源亚型。骨骼肌里 γ-actin 和平滑肌 actin 的表达量都不低，抗体如果识别保守区，就可能同时染上。

样本如果是肌肉组织，或者你的细胞系本身肌动蛋白谱系复杂，双带出现的概率明显更高。

另一个常见原因是上样量。上样过多时，条带饱和变宽，相邻的降解片段被一起照亮，看起来像两条。

把上样量从 20 微克降到 10 微克，跑一块更长的胶，很多双带会自己消失。

十个种属的那支

Ab8227 是兔多克隆，靶点 ACTB。

它的种属覆盖列得比较长，人、小鼠、大鼠、兔、鸡、狗、牛、仓鼠、鱼、非洲爪蟾。做跨物种比较，或者用鸡胚、斑马鱼这类非常规模型，选择面会宽一些。

验证应用是 WB、IHC 和 IF/ICC。厂家说明里提到 IHC-P 和 ICC/IF 有验证数据。

种属覆盖是这支抗体最实际的价值。做鸡胚、斑马鱼、非洲爪蟾这类非常规模型，很多内参抗体直接没有信号，它还能出带。

内参的正确用法

内参不是装饰，也不是每次都要跑。

它的意义在于确认每个泳道的总蛋白上样量一致。做完这一件事，它的任务就结束了。

有人拿内参的深浅去论证处理组蛋白表达上调。这在逻辑上站不住，因为内参本身也可能被处理影响。激素、凋亡诱导、细胞骨架药物，都会改变 actin 的表达。

要做定量，目的蛋白和内参各跑三次，比值取平均。单次实验的灰度比，误差经常比差异本身还大。

储存这件小事

缓冲液是 pH 7.4 的 PBS，含 1% BSA 和 0.02% 叠氮钠。运输用蓝冰，短期 4 度，长期负二十度，避免冻融。

兔多克隆的好处是批间差异相对小，坏处是用量大的时候容易一管到底。分装这一步，做与不做，半年后差别很明显。

一条稳定的内参，能让后面所有比较都变得简单。

关键参数

图 2　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。