Ki67 染不出来，八成不是抗体的问题
Anti-Ki67 antibody，兔多克隆，IHC 与 IF/ICC 双验证
切片脱蜡、水化、抗原修复、封闭、一抗过夜。
第二天 DAB 显色，镜下看了三分钟，视野里一片淡黄，找不到几个清楚的棕褐色核。
第一反应通常是抗体不行了。实际上，Ki67 这种核抗原染不出来，十次里有七八次问题出在修复那一步。
核抗原怕的是交联
甲醛固定会把蛋白交联起来，表位被裹在里面，抗体进不去。
Ki67 的表位对修复条件比较挑。柠檬酸缓冲液 pH 6.0 微波修复，和 EDTA pH 9.0 高压修复，结果经常不一样。同一批切片换一种修复方式，阳性率能从个位数跳到一半以上。
修复不足，染色弱。修复过度，组织边缘脱落、背景升高。这个窗口不宽。
这支抗体的用法
Ab15580 是兔多克隆，靶点 MKI67，验证过人源和小鼠样本。做的是 IHC 和 IF/ICC，厂家说明里写明在 IHC-P 和 ICC/IF 上做过验证。
产品页没有给固定的 IHC 稀释比，这类核抗原的浓度要跟着组织类型和修复强度一起摸。稀释液里加点血清，孵育延长到过夜，通常比单纯提高浓度更有效。
Ki67 抗体之间最大的差别，是对抗原修复的耐受度。兔多抗识别多个表位，修复过头或者修复不足，总有一部分表位还留着，这是它在不同组织上比较稳的原因。
代价是批间差异。同一批实验尽量用同一个批号，换批之后先拿一张已知阳性切片对一下。
计数别偷懒
染出来之后，增殖指数的算法比染色本身更容易出错。
只挑热点区数，指数会偏高。全片随机取五个高倍视野，各自计数再平均，数字才站得住。热点区和浸润边缘分开统计，两组数据的意义完全不同。
有人把胞浆的浅黄也算成阳性。Ki67 是核染色，胞浆着色要么是背景，要么是非特异结合，不能计。
阴性对照别省
同一张切片，省略一抗做一列阴性对照。这一步花不了二十分钟，但能省掉后面一连串的自我怀疑。
组织里如果有内源性生物素，用亲和素封闭。肝、肾这类组织尤其要留意。
染色这件事，条件固定下来比条件优化更重要。定好一套修复液、一个稀释比、一段孵育时间，之后每批切片照做，数据才有可比性。
棕褐色的小点，比任何统计软件都诚实。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse |
| 抗原名称 | MKI67 |
| 验证应用 | IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab15580 | Anti-Ki67 antibody 本文产品 |
| Abcam | Ab16667 | Anti-Ki67 antibody [SP6] |
| Abcam | Ab92742 | Anti-Ki67 antibody [EPR3610] |
| Abcam | Ab833 | Anti-Ki67 antibody |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。