GFP 拉不下来，先看标签暴露没有
Anti-GFP antibody，兔多抗，九个应用方向
过表达 GFP 融合蛋白，WB 能看到条带，很漂亮。
换成 IP，拉下来的东西里没有互作蛋白。银染一看，几乎空白。
抗体没问题，蛋白也表达了。问题在标签被折叠包进去了，抗体够不着。
标签在哪个端，决定能不能拉
GFP 是个桶状结构，N 端和 C 端在空间上位置不同。
融合在目标蛋白的 C 端，或者放在中间，GFP 的桶可能被目标蛋白的结构挡住。IP 需要抗体结合后还能被 beads 拉下来，空间位阻比 WB 敏感得多。
WB 之前样本被煮过、变性过，表位全暴露，所以能染出来。IP 在天然条件下做，抗体看到的是折叠好的构象。
这两个结果不一致，本身就是信息。
这支抗体的覆盖面
Ab290 是兔多克隆，抗 GFP。
应用列得比较长，WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IF-FRO、IP、ChIP、EM，还有 IHC-Fl。九个方向里，IP、ChIP 和电镜是比较少见的组合。
厂家说明里写的是在 ELISA、电镜、ICC/IF、IHC 冷冻和石蜡切片、IP 和 WB 上都有验证。
九个应用方向里，IP 和 ChIP 是对抗体要求最高的两项。能同时做这两项的多抗不多，选型的时候可以省掉一次试错。
增加拉下来的概率
第一步，换构建。N 端标签和 C 端标签各做一个，哪个能拉用哪个。
第二步，缩短连接臂。标签和蛋白之间夹一段柔性 linker，空间上松一点。
第三步，裂解缓冲液减配。IP 用的缓冲液去污剂浓度低一些，保持复合物完整。NP-40 或低浓度 Triton 比 SDS 温和得多。
第四步，抗体量。IP 一般用 1 到 2 微克，多了只会增加非特异。
电镜那个应用
Ab290 有电镜验证记录，这件事对做免疫金标记的人有用。
免疫电镜对试剂的纯净度要求高，缓冲液里有 BSA 或者明胶的时候，金颗粒容易团聚。抗体用前离心一下，取上清。
标签这个东西，位置比种类重要。
关键参数
| 抗原名称 | GFP |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, IF/ICC, IF-FRO, IP, ChIP, EM, IHCFl |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab290 | Anti-GFP antibody 本文产品 |
| Abcam | Ab13970 | Anti-GFP antibody |
| Abcam | Ab6556 | Anti-GFP antibody |
| Abcam | Ab6673 | Anti-GFP antibody |
参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。