GAPDH 也会变,别太信内参
Anti-GAPDH antibody,兔多抗,WB 与 IHC 通用

处理组的目的条带亮了三倍。
你很高兴,准备写进图注。然后扫了一眼内参,内参也亮了两倍。
把两组除以各自的内参,差异从三倍掉到一点五倍。再重复两次,一点五倍也没了。
GAPDH 被当成内参用了太多年,很多人忘了它是个会动的蛋白。
它会动的理由
GAPDH 是糖酵解的关键酶,表达量跟着代谢状态走。
缺氧、缺糖、氧化应激、某些抗肿瘤药物,都会上调它。这件事在业内早有共识:只靠一个管家基因做内参,本身就不可靠。
不是它不好用,是它不能无条件地用。
这支的用法
AB9485,兔多克隆,靶点是 GAPDH。
反应种属写的是人和小鼠,做这两个物种最稳。应用覆盖 WB、IHC 和 IF/ICC,厂家说明里提到 IHC-P 有验证数据。
同样标 GAPDH,多抗和单抗的表现不一样。多抗识别多个表位,信号通常更强,代价是特异性松一些,杂带也更容易出来。
多抗的特点是识别多个表位,对不同样本的兼容性通常比单抗宽一些。批间差异是它的代价,同一课题尽量用同一批号。
什么时候不该用它
做缺氧、代谢、自噬相关课题,GAPDH 的稳定性要单独验证一次。
验证方法不复杂。同一批样本,跑 GAPDH 和另外两个候选内参,看哪个在处理组和对照组之间最平。哪个平用哪个,不用默认值。
做细胞分泌蛋白的时候,内参还要换。培养液里的蛋白和裂解液里的蛋白,本来就不是一回事。
一个更省事的做法
内参不是用来证明"我的实验没问题",是用来证明"我的上样量一致"。
把这两件事分开,很多纠结会消失。上样量靠 BCA 定量控制,内参只是最后一道确认。
两者冲突的时候,先信定量,再去查内参为什么动。
内参动了,不一定是坏事。它可能在告诉你,处理起效了。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse |
| 抗原名称 | GAPDH |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C;长期 -20°C |
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