5% 脱脂奶粉，可能正在吃掉你的条带
Anti-beta Actin [mAbcam 8226]，单抗，浓度按绝对值给
同样一批样本，同样的上样量。
上个月 β-actin 还挺深，这个月换了一袋新奶粉，条带就淡了。
你会怀疑抗体降解、样本降解、转膜不均。真正变的，可能只是封闭液。
厂家写明了这件事
Ab8226 的产品说明里有一条不常见的提示。建议用 2% 到 5% 的 BSA 封闭，因为实验发现用 5% 脱脂奶粉会显著降低 β-actin 的条带强度。
这句话很多人没读到。它的意思是，这支抗体在牛奶体系里天生吃亏。
脱脂奶粉里含酪蛋白，是磷酸蛋白，也有大量生物素化蛋白。它对某些表位的封闭作用比 BSA 强，强到把目标信号也一起封住了。
这支的参数
Ab8226 是小鼠单克隆，克隆号 mAbcam 8226，IgG1 亚型，靶点 ACTB，识别人、小鼠、大鼠。
稀释比给的是绝对值，不是倍数。IHC-P 用 0.1 到 0.5 微克每毫升，做之前要先做热抗原修复。WB 用 1 微克每毫升。ICC/IF 用 5 微克每毫升。
绝对值的好处是不用算。一抗浓度按质量算，配多少体积的稀释液，直接除就行。
这支抗体给的是质量浓度，不是稀释倍数。做之前按上样量算，别照搬别人 1/5000 的经验值。
内参的位置很特殊
β-actin 是全实验室消耗最快的抗体。用得越勤，冻融越多，效价掉得越快。
分装这件事，做起来只要十分钟。十微升一管，冻在负二十度，用时取一管。
还有一点常被忽略，actin 在肌肉样本里不止一条带。骨骼肌的 γ-actin 和平滑肌 actin 表达量都高，抗体识别保守区的时候会一起染上。做肌肉组织，先跑一块长胶看清楚。
换回 BSA 试试
如果最近条带莫名其妙变淡，而你正好换了封闭液或者奶粉批次，先做一次对照。
同一张膜剪两半，一半用 5% 牛奶，一半用 3% BSA，其余条件完全一样。
跑出来的差别，往往比你想象的明显。
封闭这一步在流程里只占一小时，它决定后面所有信号的底色。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | ACTB |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG1 |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification |
| 推荐稀释 | IHC-P 0.1-0.5 µg/mL Perform heat-mediated antigen retrieval before commencing with IHC staining protocol.；WB 1 µg/mL We recommend blocking using 2-5% BSA as we have found that use of 5% milk significantly reduces the band intensity for beta actin. Please refer to the images section for the blocking comparison data.；ICC/IF 5 µg/mL |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。