多标切片里，Ki67 最容易糊
Anti-Ki67 [SP6]，兔单抗，mIHC 与流式都能用
同一张切片，同一个视野。
多抗染出来的 Ki67，核是棕的，胞浆常常也蒙一层浅棕。换成单抗，同样稀释度下，胞浆会干净很多。
mIHC 做多标的时候，这一层浅棕会变成灾难。它会串到相邻通道，让 CD8 和 CK 的阳性区域算不准。
单抗和多抗的差别在哪
多抗来自免疫后的血清，是不同克隆的混合物，识别多个表位。信号强，背景也容易高。
单抗是一个克隆，只认一个表位。信号纯净，但对样本和修复条件的要求更挑。
Ki67 是核抗原，不同克隆识别的表位不一样，出来的背景和阳性强度也就不同。SP6 是 Abcam 用自家兔单抗技术平台做出来的，IHC 和流式上的表现比较稳定。
这支的具体条件
Ab16667，克隆号 SP6，兔单克隆，靶点 MKI67，识别人、小鼠、大鼠。
应用列了五个方向，WB、IHC、FCM、IF/ICC、mIHC。多标免疫组化这一项，是它比较值钱的地方。
条件给得很明确。IHC-P 稀释 1/200，用 pH 6.0 的柠檬酸缓冲液做热抗原修复，一抗 4 度孵育过夜。mIHC 同样 1/200，修复液一样。ICC/IF 用 1/250，4% 多聚甲醛固定十分钟后，用 0.1% Triton-X 通透五分钟。流式胞内染色用 1/1000。
流式那一项还提示了同型对照的选择，用兔单克隆 IgG 做对照更合适。
SP6 是兔单抗，同一个批号能在 IHC 和流式上通用。多标实验最怕换抗体，一换就得重新摸浓度，单抗省掉的就是这一轮。
修复条件别乱改
柠檬酸 pH 6.0 和 Tris-EDTA pH 9.0，对 Ki67 的结果差别明显。
厂家给的是柠檬酸 pH 6.0。换修复液，等于换了一套条件，之前摸出来的稀释比和孵育时间都要重新验证。
高压修复比微波修复穿透力强，厚切片用高压，薄切片和细胞爬片用微波或者水浴。
计数这件事，比染色更容易错
核染色的判读标准要先定死。只看核，不看胞浆。弱阳性和背景的界限，要在阴性对照上看清楚。
视野选择也要事先定。热点区、浸润边缘、正常组织各取几个视野，写进方法学，别做完再挑。
一张片子的说服力，一半在染色，一半在你怎么数。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | MKI67 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, MIHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/200 Antigen retrieval: Heat mediated antigen retrieval with sodium citrate buffer (pH 6.0). Primary antibody condition: primary antibody incubation overnight at +4°C is recommended.；mIHC 1/200 Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；ICC/IF 1/250 If fixing cells in 4% PFA (10 min, room temp), it is recommended to permeabilized cells with 0.1% Triton-X for 5 min.；Flow Cyt (Intra) 1/1000 ab172730, Rabbit monoclonal isotype, is suitable for use as an isotype control with this antibody. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab16667 | Anti-Ki67 antibody [SP6] 本文产品 |
| Abcam | Ab15580 | Anti-Ki67 antibody |
| Abcam | Ab92742 | Anti-Ki67 antibody [EPR3610] |
| Abcam | Ab833 | Anti-Ki67 antibody |
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