凋亡做不出差异，先看 Bax 在哪儿

Anti-Bax [E63]，兔单抗，IHC 与 WB 通用

药物处理四十八小时，Bax 的 WB 条带明显变深。

你写了一句话，处理组 Bax 表达上调，促进凋亡。审稿人回了一句，Bax 的促凋亡活性取决于它在线粒体上的定位，不只是总量。

这句话是对的。Bax 平时在胞浆里，被凋亡信号激活后转位到线粒体外膜，打孔，释放细胞色素 c。总量增加只是背景，转位才是事件。

图 1　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

换一种看法

做 WB 的时候，把胞浆和线粒体组分分开跑。

Bax 在线粒体组分里的条带变深，胞浆组分变浅，才是真的转位。这一步多花两小时，结论的强度差很多。

做切片的时候，看定位。正常组织里 Bax 是弥散的胞浆着色，凋亡区域会集中到核周或者线粒体聚集处。

做流式的时候，可以用线粒体膜电位探针配合，Bax 上调加膜电位下降，两个证据互相支撑。

这支抗体的条件

Ab32503，克隆号 E63，兔单克隆，靶点 BAX，识别人、小鼠、大鼠。

应用覆盖 WB、IHC、ELISA 和 IP。条件是，IHC-P 稀释 1/250，用 pH 6 的柠檬酸缓冲液热修复。WB 用 1/1000 到 1/10000。IP 用 1/100。

Bax 的染色有个特点，正常细胞里信号弱，凋亡启动之后才明显。阴性结果不能直接判成抗体不行，先拿阳性对照组织跑一张。

Bax 和 Bcl-2 要一起看

单独看 Bax，判断不了凋亡倾向。

Bax 和 Bcl-2 形成异源二聚体，比值决定细胞对凋亡信号的敏感度。两个蛋白分两块膜跑，或者同一块膜先跑一个再 stripping 跑另一个。

比值升高，说明促凋亡倾向增强。这个说法比"Bax 表达上调促进凋亡"严谨得多。

抗体本身的坑

Bax 有多个异构体，分子量在 20 到 24 kDa 之间浮动。条带的准确位置要跟说明书给的预测分子量对上。

有些样本会出现多条带，一部分是异构体，一部分是翻译后修饰。要多跑一块胶，加阳性对照裂解液。

表达量是最容易测的指标，也是最容易被质疑的指标。

关键参数

图 2　Western blot 验证结果（图源：Abcam 官网产品页）

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