同样是抗鼠 HRP，这支范围宽一个量级
Goat Anti-Mouse IgG HRP，WB 到 1/20000
实验室的抗体柜里躺着两盒抗鼠 HRP 二抗，货号不一样。
一盒写 WB 1/2000 到 1/10000，另一盒写 1/2000 到 1/20000。
配液的时候随手拿了一盒，背景高了，也不知道是拿错了还是别的原因。
稀释范围宽说明什么
上限越高，说明这支抗体在更低的浓度下还能给出可用的信号。
Ab205719 的 IHC-P 推荐 1/2000 到 1/20000，比常规的抗鼠 HRP 二抗高一个量级。
范围宽的好处是调节空间大。背景高了往下降，信号弱了往上提，两头都有余量。
范围宽不代表随便取。同一个稀释度，在 WB 和 IHC 里的表现不一样，膜和切片的非特异结合差得远。
WB 和 IHC 的非特异来源不同，一个是膜，一个是组织，同一个稀释度不能互推。
按系统分开记稀释比，比记一个通用值准确。
这支二抗的事实
山羊抗小鼠 IgG H&L，HRP 标记，多克隆。
验证应用是 WB、IHC-P、ELISA 和 IP。
WB 推荐 1/2000 到 1/20000，IHC-P 也是 1/2000 到 1/20000，两个系统给了同一段范围。
两个系统给同一段范围，说明厂家对这两套体系都做过滴度测试。
做过测试不代表在你的样本上最优，样本类型换了照样要重调。
什么时候选哪一支
靶蛋白丰度高，比如内参、结构蛋白，选上限高的这支，背景更容易压住。
靶蛋白丰度低，比如磷酸化蛋白、核受体，二抗浓度不要太低，否则信号出不来，只能靠延长曝光补，背景跟着一起上来。
IHC 做 DAB 显色，二抗稀一些，显色时间拉长，背景更干净。
做多标的时候二抗浓度要一起降，不然第一轮的显色会盖住第二轮。
多标的顺序上，弱信号排前面，强信号排后面。
每轮之间加一步低强度剥离，把上一轮的复合物清掉。
三条实操
新开一管，先在 1/5000 试，跑一块带阳性对照的膜。这是最快的定性办法。
二抗孵育室温一小时够了。四度过夜在 HRP 系统里没有必要，反而增加背景。
洗膜用 TBST，吐温 20 加到 0.1%，洗四次。PBS 配的洗液在 HRP 系统里信号会弱一些。
末次洗膜的缓冲液吐温不要太高，残留会影响 ECL 的发光强度。
加发光液之前把膜上的水吸干，稀释过的发光液信号会弱一档。发光液现配现用，放久了活性会掉。
两盒二抗贴不同颜色的标签，配液之前看一眼，比事后排查背景省时间。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | IGHG1 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, IP |
| 偶联标记 | HRP |
| 宿主/亚型 | Goat / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 推荐稀释 | WB 1/2000 - 1/20000；IHC-P 1/2000 - 1/20000 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| Abcam | Ab205719 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) 本文产品 |
| Abcam | Ab6789 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) |
| Abcam | Ab97023 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) |
| Abcam | Ab97040 | Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) preadsorbed |
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