Iba1 只验证了 IHC，别拿它跑 WB
Anti-Iba1，山羊多抗，人和大鼠 IHC-P
脑组织的片子染 Iba1，海马区一片棕色，小胶质细胞的突起伸得很开。
同一个样本，你顺手跑了 WB。膜上除了 17 kDa 附近有一条，还有好几条杂带。
产品页上，验证应用只写了 IHC。
只写一项代表什么
厂家标验证应用，是做过实验并且给了图的那几项。
只写 IHC，说明 WB 没做验证，或者做了没通过。
一支抗体在固定切片里能认出抗原，不代表在变性后的膜上还能认。甲醛固定和 SDS 变性对蛋白构象的影响是两回事。
反过来也成立。WB 好用的抗体，做 IHC 未必行。
选抗体之前先想清楚要做哪个系统，再看验证列表有没有覆盖。
Iba1 做 WB，等于自己在摸一支没验证过的抗体，结果好不好都要自己负责。
验证列表短，不代表抗体差，只代表厂家给的信息少，剩下要自己补。补的办法很朴素，拿阳性对照组织先染一张，能出图再谈实验设计。
这支抗体的参数
Ab5076 是山羊多克隆，靶点 AIF1，反应种属写的是人和大鼠。
验证应用只有 IHC，样本是石蜡切片。
宿主是山羊，二抗要选抗山羊的。实验室常备的是抗兔和抗小鼠，抗山羊的往往要单独买，临时发现没货最耽误事。
做 HRP 显色，抗山羊的聚合物二抗比传统两步法省事，背景也低一些。
山羊 IgG 的浓度按二抗说明书给，别按抗兔的经验套。
山羊来源的麻烦
抗山羊的二抗选择少，标记的种类也少。做荧光双标时，抗山羊的 AF 系列不如抗兔的齐。
山羊 IgG 和兔、小鼠的交叉反应低，做多标时反倒是优点。
另一个办法是改用兔来源的 Iba1，双标时配对抗体好找。换宿主之前先确认新抗体的验证应用覆盖 IHC，别只看靶点一样就下单。
同一靶点不同宿主的抗体，强度和背景都不一样，换之前并排染一张。
形态学判读
Iba1 阳性看的是形态，不只是颜色深浅。
静息态的小胶质细胞胞体小，突起细长分枝多。激活态胞体变大，突起变粗变短，呈阿米巴样。
计数的时候把这两种分开，比只报阳性面积有信息量。
小鼠和大鼠的静息态形态有差别，跨物种比较时要留意。
大鼠的突起更长，小鼠的胞体更密，同一个视野里的细胞数对不上。
拍片用二十倍物镜看形态，四十倍看胞体，同一张片子两个倍数都留。定量用低倍，展示用高倍。
要做 WB 的话，另找一支标注了 WB 验证的 Iba1，别在这支上耗时间。
关键参数
| 反应种属 | Human, Rat |
| 抗原名称 | AIF1 |
| 验证应用 | IHC |
| 宿主/亚型 | Goat / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。