α-tubulin 那条带会分叉
鼠单抗 IgG2b，四物种，50 kDa 附近
做微管相关的实验，α-tubulin 当内参，50 kDa 附近一条带。
加了微管解聚的药处理，同一位置出现两条靠得很近的带。
以为是降解，换了新鲜样本还是这样。
微管状态变了，tubulin 的修饰和聚集形式跟着变，条带形态也会变。
50 kDa 那条带为什么有时分叉
α-tubulin 有多种亚型，分子量都在 50 kDa 附近，彼此差几个氨基酸。
不同组织的亚型组成不一样，脑组织里亚型多，条带容易拉开。
翻译后修饰也会改变迁移率，乙酰化、酪氨酸化都会让条带轻微位移。
定量时框主带，别把邻近的亚型带一起算进去，否则处理组会虚高。
分叉明显时先用 8% 的胶把两条带拉开，再决定框哪一条。
两条带都随处理变化，说明是修饰差异，这时候内参的作用要打折。
这支的事实
鼠单抗，IgG2b，无标记，未偶联，应用列 WB、IHC、ELISA、流式、ICC/IF、IP 六项。
种属是人、小鼠、大鼠、狗四个，分子量约 50 kDa。
缓冲液和纯化方式产品页没有细列，开管后按常规分装冻存。
IgG2b 亚型，选二抗时要用抗小鼠 IgG2b 或者广谱抗小鼠，别用只认 IgG1 的。
二抗选错的表现是完全无信号，跟抗体失效看起来一样，先查二抗再换一抗。二抗的种属和亚型两个都要对，缺一个都不出信号。
同一克隆号在多数细胞系里都能出带，属于通用型内参。
做 IP 它也能用，微管蛋白的复合物拉下来比较稳，但洗脱条件要温和。
IP 裂解液用含 1% NP-40 的，高盐会把微管蛋白复合物拆开。
固定方式决定微管形态
做 ICC/IF 想看微管网络，固定用甲醇 -20°C 十分钟，比多聚甲醛更能保住纤维结构。
多聚甲醛固定后再用 0.1% Triton 通透，也能看到网络，但纤维常断裂。
固定前用 PBS 快速洗一次，别让细胞干掉，干了微管就塌。
一抗孵育后洗涤要充分，微管信号弱时背景最明显。
组织切片用 4% 多聚甲醛灌注，再蔗糖沉底，切片时微管形态保留得更好。
三条操作建议
一抗稀释比产品页没有给，WB 从 1/5000 起，ICC 从 1/200 起。
做流式时 α-tubulin 在胞内，要固定加通透，抗体量比表面染加倍。
如果处理本身影响微管聚合，换 GAPDH 或总蛋白染色做内参更稳。
下次同一批样本跑一块 10% 的胶，把 50 kDa 附近的带拉开看清楚。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Dog |
| 抗原名称 | Alpha Tubulin |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Mouse / IgG2b |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Protein A purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
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