管底有棕色沉淀，先摇匀再用
Rabbit Anti-Mouse IgG H&L，HRP 标记，多抗
从四度冰箱拿出二抗，管底看见一层棕色。
第一反应是污染或者失效，差点直接扔掉。
产品页上写着这行说明：HRP 偶联抗体的棕色沉淀很常见，涡旋之后正常使用即可。
棕色的是什么
HRP 是糖蛋白，偶联之后在高浓度保存液里容易形成聚集体，沉降下来就是肉眼看到的棕色颗粒。
聚集体本身不一定失去活性，涡旋打散之后仍然能结合。真正需要担心的是反复冻融和细菌污染，那两种情况伴随的往往是活性下降，不只是沉淀。
所以看到棕色，先看有没有浑浊和异味，没有的话涡旋三十秒，离心去掉不溶的大颗粒，照常用。
这一条说明是厂家自己写在产品页上的，说明反馈量不小。遇到先别扔。
缓冲液里通常含甘油和防腐剂，反复冻融会让蛋白聚集加剧，分装成小份比整管反复取用稳。
这支二抗的稀释
ab6728 是兔抗小鼠 IgG 全分子，HRP 标记，多克隆。靶点是小鼠的 IGHG1。
稀释比给了两档。WB 1/10000 到 1/30000，ELISA 1/50000 到 1/300000。
WB 这一档比很多人习惯的 1/2000 稀了一个数量级。这个区间不是建议值而是可用范围，起点放在 1/10000 更合理。
ELISA 因为是液相反应，抗体可以稀到 1/300000。做板式定量的时候，这个稀释度直接决定了标准曲线的背景。
两档之间的差距来自检测方式。膜上的显色是局部反应，孔里的反应在液相，抗体浓度要更低才不产生高背景。
全分子二抗的两个副作用
它识别重链也识别轻链。做免疫沉淀之后的 WB，膜上会多出 50 千道尔顿和 25 千道尔顿附近的两条带，正好是 IgG 的重链和轻链。
目的蛋白如果落在这个区间，判断就会乱。解决办法是选轻链特异的二抗，或者在 IP 之后用交联的方式把 IgG 固定在珠子上。
另一个是鼠源样本本身的干扰。用小鼠一抗染小鼠组织，内源 IgG 会被这支二抗认出来，背景压不住。这种组合要用小鼠吸附过的二抗。
做多重染色的时候，两支二抗要选不同宿主，否则第二支会把第一支也认上。
三条操作建议
每次取用前涡旋，静置一分钟再吸，取完立刻放回四度。气泡会影响取样体积。
WB 从 1/10000 起，信号弱再往 1/5000 提，不要一上来就 1/2000。
ELISA 的稀释液里加蛋白，减少管壁吸附，低浓度那几孔的信号会更稳。
下一批膜，二抗按 1/10000 配，摇匀之后再取。
关键参数
| 反应种属 | Mouse |
| 抗原名称 | IGHG1 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA |
| 偶联标记 | HRP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification |
| 推荐稀释 | ELISA 1/50000 - 1/300000；WB 1/10000 - 1/30000 |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 +4°C |
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