CD206 染出一片，M2 反而数不清

Anti-CD206，兔多抗，人鼠大鼠都能做

肿瘤组织切片，CD206 染完在高倍镜下看，棕色铺满整个细胞质。

按阳性细胞比例一数，M2 占到六成，跟流式的结果差得太远。

流式那批用膜标记的门控，是 18%。

CD206 是膜受体

CD206 也叫甘露糖受体，属于 C 型凝集素家族，主体定位在细胞膜上，胞内也有一部分循环池。

它负责识别病原体表面的糖结构，介导内吞，所以胞内囊泡里常带着它。染色的时候，这部分胞内池会着上色。

判读 M2 极化的经典标准看的是胞膜轮廓，不是胞质颜色。膜上一圈棕色，细胞才算阳性；胞质一片棕而膜不连续，往往是内吞状态，也可能只是抗体浓度过高。

这一条决定了同一张片子能数出六成还是两成。

这支抗体的数据

ab64693 是兔多克隆，IgG 亚型，覆盖人、小鼠、大鼠三个种属。产品页标的分子量是 165 千道尔顿，WB 上条带位置比较高，转膜时间要够。

验证过的应用三个：WB、IHC-P 和 ICC/IF。组化是它的主场景。三个种属通用这一点在炎症模型里省事，人和小鼠的样本可以用同一支抗体跑同一批实验。

产品页没有给固定稀释比。多抗做组化时浓度窗口比较宽，但也容易过浓，第一片建议从较稀的一档试。

纯化方式是免疫原亲和纯化，液体剂型。多抗的背景比单抗略高，封闭这一步值得多花时间，用血清比用 BSA 稳。

判读和定量

先在低倍下分区，肿瘤实质、瘤旁间质、坏死区分开统计。坏死区非特异吸附多，不要计入。

高倍下只看胞膜。把阳性定义为膜轮廓清晰、连续，胞质着色不作为阳性依据。同一张片子上如果出现散在的强阳性单个细胞，先看它是不是肥大细胞，这类细胞颗粒多，容易假阳性。

有条件的做双标，CD206 配一个泛巨噬细胞标记，两者的比值比绝对计数更稳定。

流式上 CD206 的表达量不高，荧光减一对照必须做。不分 FMO，阳性群的边界靠猜，批次之间就没法比。

三条操作建议

抗原修复按产品页要求做，膜蛋白的表位常常需要热修复才能暴露。切片厚度控制在四微米左右，厚了细胞叠在一起，膜轮廓分不开。

一抗孵育之后多洗两次，CD206 的胞内池会拖住抗体，洗不干净背景发浑。

同片放一张用同型对照替代一抗的切片，用来定背景阈值。拍照参数固定，同一批片子用同一档曝光，不要逐张自动调。

下一批切片，先把判读标准写成一句话贴在显微镜旁边，再开始数。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	MRC1
验证应用	WB, IHC, IF/ICC
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Polyclonal
纯化方式	Affinity purification Immunogen
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
Abcam	Ab64693	Anti-CD206 antibody 本文产品
Abcam	Ab8918	Anti-CD206 antibody [15-2]
Abcam	Ab125028	Anti-CD206 antibody [EPR6828(B)]
Abcam	Ab300621	Anti-CD206 antibody [EPR25215-277]

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