β-catenin 做 ChIP，先看超声

Anti-beta Catenin [E247]，ChIP 级，五个系统

交联、裂解、超声，一轮打完，取 10 微升跑胶看片段。

琼脂糖上一片拖尾，从加样孔一直到几百碱基，主带在上端。

接着往下做，到头来 qPCR 的富集倍数不到两倍，跟 IgG 对照差不多。

片段大小决定成败

ChIP 的信号来自抗体抓住的那一段染色质。片段太大，抓下来的是一大块，目标位点和旁边没有结合的区域混在一起，富集被稀释。

片段太小，蛋白与 DNA 的交联容易被过度打断，抗体抓到了蛋白，DNA 那头却断了。

常规做法是把主带压在几百个碱基对的区间，超声的功率、次数和间歇都要固定下来，每批样品先跑一次胶确认。

超声的另一个变量是细胞量。细胞多了，同样的功率打不透，片段偏大；细胞少了，容易打过。

产品页标的分子量是 86 千道尔顿。做 WB 的时候条带位置跟磷酸化状态有关，非磷酸化版本跑得更快一点。

这支抗体的五个系统

ab32572 是 E247 克隆，兔单克隆，IgG 亚型，覆盖人、小鼠、大鼠三个种属。

验证应用写了七个，其中五个常用：WB、IHC-P、ICC/IF、IP 和 ChIP，另外还标了 mIHC 和 CUT&RUN-seq。

稀释比是分开的。WB 1/5000 到 1/10000，IHC-P 1/500 配柠檬酸 pH 6 热修复，ICC/IF 1/250，IP 1/30，mIHC 1/250。

纯化方式是 protein A 亲和纯化，液体剂型。单抗的批间一致性比多抗好，做定量实验时这一点很重要。

WB 那一档很稀，1/5000 起，说明这支抗体的亲和力不低。IP 的 1/30 是全表最浓的，两者差了一百多倍，不要互相搬。

β-catenin 的三个池

这个蛋白在细胞里有三个位置：膜上跟 E-cadherin 结合，胞质里参与降解复合物，核内作为转录共激活因子。

做 ChIP 关心的是核内那一部分。样品制备时如果核质分离不干净，胞质里的蛋白会带进反应，背景上去。

IHC 判读也是一样。正常上皮的膜着色很清楚，核着色才提示通路激活。只看到胞质弥漫，不能下结论。

做 CUT&RUN-seq 时抗体量按反应数算，细胞少的时候不要靠增加循环数补信号。

三条操作建议

超声之后必跑胶，片段不合格就不要往下做，重做比做完再返工便宜。

ChIP 反应设三个对照：input、同型 IgG、以及一个已知阳性位点的引物。

IP 按 1/30 加，裂解液的蛋白量先定量，按微克算，不按体积算。

下一批样品，超声之后先跑胶，片段合格了再往下走。

关键参数

反应种属	Human, Mouse, Rat
抗原名称	CTNNB1
验证应用	WB, IHC, IF/ICC, MIHC, IP, ChIP, CUT&RUN-seq
宿主/亚型	Rabbit / IgG
抗体类型	Monoclonal
纯化方式	Affinity purification Protein A
推荐稀释	IHC-P 1/500 Perform heat-mediated antigen retrieval with citrate buffer pH 6 before commencing with IHC staining protocol.；mIHC 1/250；WB 1/5000 - 1/10000 We recommend Goat anti-Rabbit IgG H&L (IRDye ® 800CW) preadsorbed ( ab216773 ).；ICC/IF 1/250 We recommend Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor ® 488) preadsorbed ( ab150081 ) secondary antibody.
储存条件	短期 +4°C；长期 -20°C

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品牌	货号	品名
Abcam	Ab32572	Anti-beta Catenin antibody [E247] - ChIP Grade 本文产品
Abcam	Ab16051	Anti-beta Catenin antibody
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Abcam	Ab22656	Anti-beta Catenin antibody [12F7]

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