同一支抗体，IHC 能稀到 1/14000
Anti-E Cadherin [EP700Y]，WB 与 IHC 两套数
接手别人的实验，记录本上写着 E-cadherin 一抗 1/200。
照做，切片上膜和胞质全棕，背景厚得像铺了一层。
翻产品页，IHC-P 那一栏写的是 1/500 到 1/14000。差了两个数量级。
稀释区间为什么这么宽
同一个货号会分纯化抗体和未纯化的形式。纯化之后蛋白浓度确定，可以稀得很开；未纯化的腹水或者培养上清，杂蛋白多，只能浓用。
产品页上的区间是把两种形式都涵盖进去的结果。买的是哪一种，用哪一档，这一层要分清楚。
ab40772 的 WB 栏写了 1/1000 到 1/50000，后面还跟了一句：未纯化蛋白可用到 1/200000。这个数字不是给纯化抗体的。
拿到手先看管子上标的浓度，再决定从哪一档起。
这支抗体的数据
EP700Y 克隆，兔重组单克隆，IgG 亚型，靶点是人的 Cdh1，种属只写人。
纯化方式是 protein A 亲和纯化，液体剂型，产品页标的分子量是 80 千道尔顿。
验证应用写了六个：WB、IHC-P、流式、ICC/IF、mIHC 和多重组化。
四档稀释分别是：WB 1/1000 到 1/50000，IHC-P 1/500 到 1/14000 配 Tris/EDTA pH 9.0 热修复，ICC/IF 0.2 到 1 微克每毫升，流式胞内 1/30，纯化形式可用到 1/1000。
膜蛋白的判读
E-cadherin 在细胞间连接处，正常上皮呈蜂窝状网格。
判读看三件事：膜轮廓是否连续，着色是否均匀，有没有跑到胞质里。同一批片子用同一支二抗，换批之后染色强度会变，定量之前先跑一张对照片。
只看到胞质弥漫着色，不一定是表达下降，可能是一抗过浓之后非特异地渗进去了。这一点在 1/200 那种浓度下最常见。
多重组化里膜标记容易过曝，抗体的孵育顺序和显色时间都要单独定。多标的时候它的信号强，容易压过同片上的弱标记，排到末轮做。
三条操作建议
IHC 从 1/2000 起，比说明书下限稀，先看背景能不能压住，再决定往哪边走。
WB 用 1/5000 起，这支抗体的有效区间很宽，没必要一开始就浓。
流式胞内 1/30，同型对照选 ab172730，按同浓度配。做梯度的时候一次只改一档，同时改修复液和浓度，出了问题分不清是谁的错。
下一批切片，一抗从 1/2000 起，先跑一张看背景。
关键参数
| 反应种属 | Human |
| 抗原名称 | Cdh1 |
| 验证应用 | WB, IHC, FCM, IF/ICC, MIHC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 推荐稀释 | IHC-P 1/500 - 1/14000 Perform heat-mediated antigen retrieval with Tris/EDTA buffer pH 9.0 before commencing with IHC staining protocol.；WB 1/1000 - 1/50000 For unpurified protein: 1/200000 dilution；ICC/IF 0.2-1 µg/mL；Flow Cyt (Intra) 1/30 ab172730 - Rabbit monoclonal IgG, is suitable for use as an isotype control with this antibody. For purified format use at 1/1000. |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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参数与产品价格以生知库产品页实时信息为准。文中实验图片取自厂家官网产品页，仅用于说明该抗体的验证情况。