E-cadherin 染的不是细胞质
36/E-Cadherin 克隆，250 µg/mL 原液
肠上皮的切片染完，整层细胞胞质里都是均匀的浅棕。看起来挺整齐，审稿意见下来第一句就问，为什么没有膜定位。
因为这不是膜染色。匀浆状的胞质着色，多半是抗体浓度过了或者封闭没做够，真正的阳性信号被盖在里面。
120 kDa 的跨膜糖蛋白
E-cadherin 是一个 120 kDa 的跨膜糖蛋白，集中在 epithelial 细胞的黏附连接处。
它的胞内段和 catenin 家族结合，通过它们连到皮层肌动蛋白束上。这个连接是细胞黏附的结构基础，也是上皮极性维持的关键。
酪氨酸磷酸化会打断这个复合物。磷酸化之后，E-cadherin 从膜上脱落，细胞之间的贴合松开，这在 EMT 和肿瘤侵袭里是常见的一步。
所以判读的时候，膜上那条线有没有断开，比整体颜色深不深更有意义。肿瘤组织里常见的表现是膜信号斑片状缺失，而不是全面变淡。
免疫原在 C 端，位置决定了它能看见什么
产品页写的免疫原是人的 E-cadherin C 端重组蛋白。
C 端落在胞内段，靠近 catenin 结合区。这个位置的好处是，抗体能识别结合在复合物里的 E-cadherin，也能识别已经脱落的那部分。
做免疫沉淀的时候，这一点有价值。拉下来的复合物里可能同时带上 catenin，能顺着往下看相互作用。
做 IHC 的时候要留意，C 端抗体的信号更集中在膜的胞内侧。高倍下看到的是一条贴着膜的细线，而不是整个膜面均匀发亮。
250 µg/mL 的原液，稀释空间很大
浓度 250 µg/mL，一支的量按常规稀释比用绰绰有余。
储存写的是负二十度，原液不稀释直接放。缓冲液含 BSA、甘油和不超过 0.09% 的叠氮钠，甘油起防冻作用。
反应种属是人、小鼠、大鼠、狗。四个种属的 E-cadherin 胞内段序列保守度不低，跨种属用的时候，先跑一张阳性组织确认。
应用里有 WB、IHC、IF/ICC、IP 四项，同一个克隆在四个系统都做过。
三条操作建议
固定用 4% 多聚甲醛，不要用甲醇。甲醇对膜蛋白的构象影响大，IF 的时候容易看到斑点状假信号。
IHC 的抗原修复用柠檬酸 pH 6.0，微波低火。EDTA 修复对这支不是必需的，修过头会让膜信号变散。
判读分两遍。先低倍看整体结构，腺体的腔面是不是连续；再高倍看单个细胞的膜线断没断。两遍的结论不一致时，以高倍为准。
下次染完片子，先把物镜推到六十倍看膜。膜不清楚，浓度调得再准也没用。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Dog |
| 抗原名称 | E-cadherin |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Mouse IgG2a, κ |
| 抗体类型 | Monoclonal |
| 纯化方式 | affinity chromatography |
| 储存条件 | Store undiluted at -20°C. |
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