胶原 IV 染九个种属，换模型不用换抗体
Anti-Collagen IV，兔多抗，跨九个种属
课题从大鼠换到猪，再换到斑马鱼，血管标记的抗体换了三支，只有最后一支还能用。
换抗体的成本不只是钱，还有重新摸条件的两个月。
同学后来翻到这支的种属栏，前面那两次换抗体本来就多余。
种属栏长得出奇
产品页列的反应种属是人、小鼠、大鼠、狗、猪、猴、牛、仓鼠、鱼。
九个种属，覆盖了大多数常见的实验动物。
IV 型胶原的序列在各物种之间保守度高，这是能跨这么多种属的原因。
跨物种不是随便标的。做斑马鱼这类不常见的样本，动手之前先看一眼产品页的说明。
一支通用，省下的是整套条件摸索的时间。
跨物种用同一支抗体，组间比较也干净。不同批号、不同克隆之间的差异，在跨物种课题里会被放大。
应用列得更长
验证系统是 WB、IHC、ELISA、IF/ICC、IF、IP、IHC-Fr、IHC-FrFl、IHC-FoFr。
后面这几项都是冰冻切片的变体，Fr 是冰冻切片，FrFl 是冰冻漂浮片，FoFr 是固定后冷冻。
漂浮片做脑片的人用得多。切片不贴片，在孔里飘着孵育，抗体从两侧进，厚片也能染透。
能做 IP 说明这支也认天然的构象。WB 只认变性后的线性表位，两者能同时做，说明表位分布得比较散。
基底膜的位置感
IV 型胶原是基底膜的主要成分，围着血管、腺体、肌纤维走。
正常组织里它是细而连续的一圈，肿瘤组织里常常断断续续，或者多层堆叠。
判读的时候先看连续性，再看厚度。连续性比厚度更早出现变化。
血管密度分析用这支做底图很常见。血管腔不必染出来，围着腔的那圈基底膜就够定位。
肿瘤里的基底膜常常包着还没有腔的血管芽，这些结构在低倍下是实心的小圈，计数的时候算不算，要提前定规则。
背景重的时候先看间质。间质里如果有一层弥散的棕色，多半是抗体浓度过了，不是真信号。
操作上的几点
石蜡切片的修复不要太猛，基底膜的抗原在强修复下容易丢。
冰冻切片的固定用冷丙酮或者多聚甲醛，固定时间过长会让基底膜收缩。
漂浮片孵育的体积要够，孔里液体太少，切片会贴在孔壁上，染色不均。
多抗没给固定稀释比，第一次按 1/200 起摸，同一块组织做三个梯度。
ELISA 和 IP 的用量跟切片完全不是一回事。做 IP 的时候按蛋白量算抗体，不要按切片的稀释比折算。
下一批样本，猪和鱼的组织各切两张，一张石蜡一张冰冻，抗体统一用一个浓度，先看两套系统的信号差多少。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Monkey, Bovine, Hamster, Fish |
| 抗原名称 | COL4A1 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, IF/ICC, IF-FRO, IP, IF, IHCFl |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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