神经管上那圈线，别修过头
Anti-N Cadherin 兔多抗，四项应用验证
脊髓切片的荧光图上，本来该有一圈勾勒神经管的细线，结果整片都亮，中间的管腔和周围的基质分不开。
抗体浓度往下调了两档，还是亮的。问题在抗原修复那一步，修了二十五分钟。
N-cadherin 管的是另一种黏附
E-cadherin 把上皮细胞连成片，N-cadherin 把间质细胞、神经细胞、心肌细胞连起来。
两者的胞内段都结合 catenin，胞外段的结构也相似，但表达的部位和时机不一样。发育过程里，上皮向间质转化的时候，E-cadherin 下调，N-cadherin 上调，这个切换是 EMT 的标志性事件。
所以做肿瘤样本的时候，两种 cadherin 常常要一起染。只看一个，容易把侵袭前沿的细胞群看漏。
产品页标的分子量是 82 kDa，实际跑胶的位置会受糖基化程度影响，不同组织的条带位置可能略有差别，以自己跑的 marker 为准。
修复强度和膜信号是反的
膜蛋白的抗原决定簇在甲醛固定后会被交联包埋，修复是把这些交联打开。
修得不够，信号弱；修过头，膜结构本身被破坏，抗体找不到边界，整片都染上。
这支的经验是 Tris-EDTA pH 9.0，微波中低火，沸腾后十二到十五分钟。这个时间比核抗原短，因为膜蛋白的构象更脆。
修复完自然冷却。急着降温会让切片脱片，也会让膜信号收缩成颗粒状。
四个应用，三种样本准备
WB 看 82 kDa 附近。脑和心肌样本里 N-cadherin 丰度高，上样量可以比常规少一点。
IHC-P 看膜线的连续性。正常组织中，神经管的室管膜面、心肌的闰盘都是典型位置。
ICC/IF 看细胞间的接触面。培养的成纤维细胞铺满之后，细胞交界处会显出一条清楚的线，这是最直观的阳性证据。
IP 用这支的时候，裂解液要温和。N-cadherin 和 catenin 的复合物靠非共价结合，SDS 浓度高一点就散了，拉下来只剩单体。
三条操作建议
封闭液里加 0.1% 的 Triton X-100，帮助抗体穿透到细胞间隙。膜蛋白的位置浅，透化过度反而会让信号内移。
一抗孵育四度过夜。膜蛋白的接触面积小，时间长一点，背景和信号的分离更清楚。
双标的时候，把 N-cadherin 和波形蛋白放在一起看。两个都在间质细胞上，重合度高低能反映细胞状态。
下次做修复，把计时器放在台面上，十二分钟响一次。这一分钟，决定的是膜线还在不在。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat |
| 抗原名称 | CDH2 |
| 验证应用 | WB, IHC, IF/ICC, IP |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Immunogen |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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