标签抗体，先跑空载
mCherry 兔多抗，WB 与 IF 两项
转染 mCherry 融合质粒，四十八小时后收蛋白跑 WB。除了预期位置，下面还多出两条弱带。
同一天把空载体也转了一盘，一起跑。空载泳道在那个位置什么都没有。
多出来的两条不是抗体不干净，是融合蛋白降解后剩下的标签片段。
标签抗体认的是标签
mCherry 是从珊瑚里改造来的红色荧光蛋白，实验室常把它接到目标蛋白的 N 端或 C 端，用来看定位。
标签抗体的优势在于通用。一个抗体能配几十个不同的融合蛋白，不用为每个目标单独买。
限制也在这儿。它认标签，不认目标。所以它给的信号只说明「标签在哪儿」，不说明「目标蛋白在干什么」。
所以它适合做两件事。确认融合蛋白有没有表达，确认它跑到细胞的哪个位置。再往下的功能问题，得靠目标蛋白自己的抗体。
这支的事实
兔多抗，IgG，不带标记。反应种属一栏是空的，因为它认的是外源标签，不针对某个物种的内源蛋白。
应用列了两项，WB 和 IF/ICC。这两个恰好是标签抗体最常用的两个场景，定位加分子量确认。
多抗做标签检测有个实际好处，标签被部分降解、构象变了，还可能有位点能结合。
不带荧光的这一支，做双标时要配一个别的宿主的二抗，或者直接换带荧光标记的版本。
空载对照为什么不能省
融合蛋白在细胞里会被部分降解。切掉目标蛋白，剩下一段带着标签的碎片，分子量比全长小。
WB 上就表现为预期带下面多出几条。不跑空载，很容易把这些片段当成真实表达。
IF 上更麻烦。碎片也会发光，定位可能跟全长完全不同，拍出来的图看着有信号，实际是假象。
每次转染都留一盘空载，跟样本同批处理、同一张膜跑，这是标签抗体实验的基本盘。
片段的比例还能当质量指标。同一批样本碎片特别多，往往是收样时蛋白酶没压住，或者转染时间太长。
三条操作建议
WB 上样前先看荧光。转染效率肉眼可见，红的那盘蛋白量往往也高，上样量要按荧光强度和内参一起调。
IF 固定用 4% 多聚甲醛，别用甲醇。甲醇会把荧光蛋白的构象破坏掉，标签抗体可能认不出来。
mCherry 的激发在橙色通道，跟 GFP、DAPI 都能分开。多色的时候注意别跟 Texas Red 一类染料排在一起。
判读时先看全长那条。全长在，碎片只是背景；只有碎片没有全长，说明蛋白被切了，数据不能用。
下次转染，空载和融合各转一盘，同时收，同时跑，标签抗体的数据才有底。
关键参数
| 抗原名称 | mCherry |
| 验证应用 | WB, IF/ICC |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Affinity purification Protein A |
| 储存条件 | 短期 +4°C；长期 -20°C |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
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