ZO-1 染出来是网格
ZO-1 兔多抗，五物种八类应用
肠上皮细胞爬片染 ZO-1，本该是沿着细胞边界走的一圈细线。拍出来中间一片弥散，边界看不清。
两组对照一看，正常组还勉强看得出轮廓，处理组整片糊掉。第一反应是抗体浓度高了。
降了一半浓度，轮廓出来一点，但处理组的线还是断的。这时候才想到，断线可能不是染色问题。
它是连接处的脚手架
ZO-1 全称 Zona Occludens 1，在细胞与细胞接触的地方，是紧密连接复合物的核心成员。
它的活是把跨膜蛋白和细胞骨架连起来，把 claudin、occludin 这些固定在位上。
紧密连接一旦松动，ZO-1 会从膜上掉到胞质里，染色图样从「线」变成「弥散的斑」。这个变化本身就是屏障功能的读数。
在脑组织里它也做血脑屏障的读数。微血管内皮之间的连接松紧，染色图样比测通透性更直接。
这支的事实
Proteintech 的兔多抗，IgG，不带标记。反应种属写了人、小鼠、大鼠、狗、仓鼠五个。
应用列了八项，WB、IHC、ELISA、FCM、IF/ICC、IF-P、IF-FRO、IP。原位三类全覆盖，石蜡、冰冻、爬片都能做。
五个种属在同类抗体里算多的。做仓鼠模型的不多，能用上的时候省不少事。
多抗的批间差异要留意。做长期屏障实验，尽量一次订够同一批号，中途换批要重新对图样。
断线到底说明什么
膜上的线断成一截一截，有两种可能。一是蛋白真的降解或者重新分布，属于生物学变化；二是固定和通透把抗原破坏了。
区分办法是加一个膜蛋白内参同染，比如 E-cadherin。两个都断，倾向于样本本身；只有 ZO-1 断，先怀疑处理条件。
固定用 4% 多聚甲醛十分钟，不要过夜。通透用 0.1% Triton 五分钟，时间长了膜蛋白会被洗掉。
爬片长到八成满再固定，太稀的细胞没有接触，本来就没有紧密连接可染。
定量之外还要看分布。ZO-1 从膜上掉进胞质，即使总量没变，功能也已经变了。
三条操作建议
产品页没给固定稀释。IF 从 1/200 起，1/100 和 1/400 各配一张，挑边界最锐的那档。
拍图时统一曝光。ZO-1 的信号强度在组间会变，但图样变化比强度更有说服力，别只报平均荧光强度。
定量用轮廓完整度或者线长，不要只圈整个视野算亮度。
下次做屏障实验，每批都留一张阳性对照爬片一起染，图样对不上就停，别往下算数据。
关键参数
| 反应种属 | Human, Mouse, Rat, Dog, Hamster |
| 抗原名称 | ZO-1 |
| 验证应用 | WB, IHC, ELISA, FCM, IF/ICC, IF-P, IF-FRO, IP |
| 偶联标记 | Unconjugated |
| 宿主/亚型 | Rabbit / IgG |
| 抗体类型 | Polyclonal |
| 纯化方式 | Antigen affinity purification |
| 储存条件 | Store at -20°C. Stable for one year after shipment. Aliquoti |
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| 品牌 | 货号 | 品名 |
|---|---|---|
| proteintech | 21773-1-AP | ZO-1 Polyclonal antibody 本文产品 |
| abclonal | A0659 | ZO-1 Rabbit pAb |
| proteintech | 60004-1-Ig | GAPDH Monoclonal antibody |
| proteintech | 10494-1-AP | GAPDH Polyclonal antibody |
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